白藜芦醇对髓母细胞瘤细胞Sonic hedgehog信号通路的影响及其神经生物学意义分析

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lichlei
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目的:1)观察Sonic hedgehog(Shh)信号通路及其下游靶基因Nmyc在人髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)中的表达情况;2)分析白藜芦醇(resveratrol, Res)对人MB细胞系UW228-2和UW228-3的Shh信号通路及其下游靶基因Nmyc表达的影响,探讨Res对人MB作用的分子机制,从而为临床改善MB的治疗现状提供理论依据。方法:从临床收集18例人MB脑组织及11例大鼠脑组织的石蜡包埋标本,利用自行研制的组织微阵列仪制成石蜡组织微阵列,进行Shh和Gli1的免疫组织化学染色(IHC),观察这些因子在人MB及大鼠脑组织中的表达情况。UW228-2、-3细胞系培养于含有10%胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)培养基中,用100μM Res处理细胞48h。为便于细胞形态观察和免疫细胞化学染色(ICC),将无菌细胞爬片预先置于培养皿中,取出时用冷丙酮固定。同时制备细胞悬液并离心沉淀用于RNA和蛋白质的提取。采用RT-PCR、Western-Blotting和ICC等方法分析Res处理前后UW228-2,UW228-3中Shh、Gli1和Nmyc的表达改变情况。结果:1)Shh和Gli1在人MB组织中染色阳性率分别为88.89%和94.44%,均强于对照组;2)Res有效抑制UW228-2、-3生长,诱导其分化和调亡,在mRNA和蛋白水平上,Res下调Shh、Gli1和Nmyc的表达。结论:1)人MB组织中Shh、Gli1和Nmyc的表达高于对照组。因此,Shh信号通路在大多数人MB中处于活化状态。2)首次发现,Res在抑制人MB细胞系UW228-2、-3细胞增殖,促进分化并诱导凋亡的同时,还在mRNA和蛋白水平抑制Shh、Gli1和Nmyc的转录与产生。Res对人MB细胞Shh信号通路的抑制可能与其增殖抑制、促分化和凋亡功能有某种内在联系。
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