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第一部分靶向干扰PCA-1的shRNA质粒表达载体的构建与鉴定目的成功构建前列腺特异膜抗原增强子/启动子(PSMAe/p)调控的靶向的shRNA重组质粒PSMAe/p-shPCA-1。方法人工合成针对PCA-1基因的shRNA对应模版的DNA序列,将此序列定向克隆到含有BamH I、EcoR I双酶切位点载体质粒pSIREN-RetroQ-ZsGreen,然后再连接到含有Sal I、Bam H I双酶切位点PSMA增强子/启动子的质粒载体(PSMAe/p)上。重组质粒经菌液PCR、限制性内切酶酶切和测序进行鉴定；结果通过PCR,质粒双酶切电泳和靶向序列测序鉴定,人工合成的靶向干扰片段成功插入载体PSMAe/p上,重组质粒载体双酶切图谱和靶向序列检测结果符合预期结果。结论成功构建以前列腺特异性膜抗原增强子/启动子驱动的靶向干扰PCA-1的shRNA质粒表达载体PSMAe/p-shPCA-1。第二部分PSMAe/p驱动shRNA靶向PCA-1抑制PCa细胞实验研究目的观察人前列腺癌抗原-1基因沉默后对不同前列腺癌细胞系的影响,探索人前列腺癌抗原-1基因与前列腺癌进展、恶性增殖、转移浸润能力的关系。方法首先用免疫组化方法检测人前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3中PCA-1表达；通过脂质体LipofectamineTM2000介导重组质粒转染人前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3细胞中。应用细胞划痕实验观察转染细胞的迁移能力变化,MTT法检测干扰后细胞体外增殖情况,同时通过Transwell细胞浸润实验检测干扰后细胞转移浸润能力；应用流式细胞仪检测转染后细胞内PCA-1的变化。结果人前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3中均有PCA-1蛋白表达；干扰后LNCaP细胞的迁移能力明显下降,体外增殖速率明显下调,浸润能力显著减弱。而在PC-3细胞中细胞迁移能力、增殖速率和迁移能力均无明显改变。结论PSMAe/p能够特异性驱动shRNA靶向干扰人PCA-1基因；PCA-1基因在LNCaP细胞恶性增殖、转移、浸润中起着非常重要作用,PCA-1可能是今后前列腺癌基因治疗中比较理想靶基因,随着研究深入其将会在前列腺癌治疗中发挥越来越重要的作用。