研究背景结节性硬化症是一种常染色体显性遗传病,主要特征是在多个组织器官中出现良性肿瘤,比如脑部、心脏、肾脏等。该疾病常见临床表现为面部血管纤维瘤、癫痫发作、智力低下等,严重影响患者的生活质量,总结其临床表现与基因突变之间的关系,尽早对该疾病进行诊断治疗,改善预后,甚至行产前诊断、提前干预,降低发病率及患病后的临床症状。目的现总结我院门诊及住院11个家系中11名结节性硬化症患儿的临床表现及其影像学改变,通过基因测序研究分析其基因突变类型,总结临床表现与基因突变之间是否存在一定的关系,推测其相关性。方法在征得家属知情同意的情况下,该实验收集了11个结节性硬化症患者及其父母的临床资料、头颅影像学检查及外周血样,同时收集了10名正常儿童的外周血样,以排除基因多态性,利用基因组DNA提取试剂盒提取外周血基因组DNA,根据人类基因组数据库中查找的TSC1基因、TSC2基因,分别设计引物,采用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reactiong,PCR)技术进行体外扩增,应用PCR产物回收试剂盒进行PCR产物回收、纯化,请上海生物公司采用DNA直接测序的方法对TSC1、TSC2基因的外显子及侧翼序列测序,对其测序结果与GenBank中的序列对比分析,查找基因突变位点及其类型,对发现突变的采用TA克隆技术进一步验证,判断其可靠性。结果1.PCR扩增片段与预计扩增片段长度一致,无非特异扩增片段,可进行纯化和测序；2.家系1中先证者TSC1基因第14外显子发生无义突变(37841T>A),使得该外显子编码功能终止,TSC2基因第32外显子发生杂合同义突变(36536C>T),先证者父母相应外显子未见异常；3.家系2中先证者TSC2基因第29外显子发现基因杂合突变(32254C>T),出现丙氨酸被苏氨酸替代,先证者父母相应外显子未见异常；4.家系5中先证者TSC1基因第15外显子发现同义突变(38782T>C),其父母相应外显子未见异常；5.家系6中先证者TSC1基因第14外显子发现杂合突变(37841T>A)使得编码功能终止,其父母相应外显子未见异常,；6.家系7中先证者TSC1基因第18外显子发现杂合突变(43834G>A),出现丙氨酸被色氨酸替代,其父母相应外显子均未发现异常；7.余6家系先证者及其父母未发现TSC1、TSC2基因突变。结论1.11个家系中的先证者临床表现及影像学异常符合结节性硬化症的诊断标准,诊断明确,可进行积极治疗,改善症状；2.家系1、2、6、7中发现的突变为先证者发病的分子遗传学基础,考虑均为散发病例,可进行产前诊断及遗传咨询,有利于基因诊断的实施；3.家系5中发现同义突变的位点,认为不引起表型异常,尚不确定发病原因,与国外报道一致；4.余6个家系先证者未发现TSC1基因、TSC2基因突变位点,考虑可能存在非编码序列突变或者其他候选基因存在,需要进一步分析研究,与国外报道一致；5.4个确定基因突变的先证者中有两个突变位点及类型相同,现尚不能确定存在热点突变,与国内外报道一致。