论文部分内容阅读
目的:采用Survivin反义寡核苷酸（Antisense Oligodeoxynucleotides,ASODN）复合物抑制Survivin表达,研究其对槲皮素诱导肝癌SSMC-7721细胞凋亡的影响。方法:体外培养人肝癌SSMC-7721细胞,取对数生长期细胞进行实验。实验分Ⅰ、Ⅱ两部分:Ⅰ部分分为空白对照组（设平行组）、等量脂质体LipofectamineTM2000对照组、400nmol/LSODN复合物组、400nmol/LASODN复合物组（设平行组）,转染48h;Ⅱ部分弃掉Ⅰ部分各组培养液,换新指定培养液,分为空白对照组、40umol/L槲皮素组、脂质体LipofectamineTM2000组、SODN复合物组、ASODN复合物组、ASODN复合物+40umol/L槲皮素组（联合组）,孵育细胞24h后检测。Ⅰ部分结束时采用RT-PCR、细胞免疫组化染色检测各组SSMC-7721细胞Survivin基因表达变化;Ⅱ部分结束时用吖啶橙（Acridine Orange,AO）染色法观察细胞凋亡时形态变化,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测SSMC-7721细胞生长抑制率,Annexi-V/PI双染流式细胞仪检测SSMC-7721细胞凋亡率,PI单染流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:ASODN复合物作用肝癌SSMC-7721细胞48h后能下调Survivin mRNA及survivin蛋白的表达（P＜0.01）;与其他组比较,联合组AO染色图片可观察到凋亡小体等典型的细胞凋亡形态特征变化且凋亡细胞数量明显增多,并用MTT法、Annexi-V/PI双染流式细胞仪检测显示联合组细胞的生长抑制率明显增高（P＜0.01）、细胞凋亡率提高（P＜0.01）,PI单染流式细胞仪检测细胞周期发现Survivin反义核苷酸能将肝癌细胞阻滞于G2/M期（P＜0.01）,槲皮素能将肿瘤细胞阻滞于S期（P＜0.01）,联合组对肿瘤细胞G2/M期、S期均有阻滞作用（P＜0.01）。结论:①肝癌SSMC-7721细胞高表达survivin蛋白,ASODN复合物可有效抑制肝癌细胞Survivin基因的表达。②ASODN复合物能够抑制肝癌SSMC-7721细胞增殖,诱导肝癌细胞的凋亡,且对肿瘤细胞有G2/M期阻滞作用。③槲皮素能够抑制肝癌SSMC-7721细胞增殖,诱导肝癌细胞的凋亡,且对肿瘤细胞有S期阻滞作用。④ASODN复合物能增强槲皮素对SSMC-7721细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡的作用,该作用可能与抑制Survivin基因的表达有关,即ASODN与槲皮素对诱导肝癌细胞凋亡具有协同作用。