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[目的]新型毒品成瘾是一种以强烈的药物渴求和复吸特征的脑疾病,在戒断期表现出情绪失落、焦虑烦躁、抑郁等症状,对人类健康和社会发展的构成了新威胁。本研究通过构建C57BL/6J小鼠甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH)成瘾戒断模型,检测不同脑区谷氨酸转运体1(GLT-1/SLC1A2/EAAT2)的表达情况,用头孢曲松钠(Ceftriaxone,CE)干预调节GLT-1的表达,进一步观察CE调节GLT-1后对戒断期焦虑症状的影响,探讨GLT-1在METH戒断期焦虑中的作用。[方法]首先,我们利用浓度梯度探索构建了小鼠成瘾模型的最佳给药浓度:正常C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:阴性对照组(CTL,n=8)、2.5mg/kg甲基苯丙胺组(METH1,n=8)、5mg/kg 甲基苯丙胺组(METH2,n=8)、10mg/kg 甲基苯丙胺组(METH3,n=8),分别进行METH或生理盐水腹腔注射(i.p.)诱导条件位置偏好(Conditioned place preference,CPP),训练结束后进行CPP检测,并分析最佳成瘾浓度。其次,根据CPP的最佳浓度,结合人类甲基苯丙胺使用递增的特点,我们使用递增剂量建立METH第一周5 mg/kg,第二周10mg/kg,第三周15mg/kg的小鼠模型;造模结束后立即对CTL和METH组分别进行经典动物焦虑行为高架十字迷宫(Elevated Plus Maze,EPM)和旷场试验(Open Filed Test,OFT)等行为学测试,分析两组之间的差异;行为学检测结束的小鼠麻醉后,用4%多聚甲醛灌流,取脑组织。一部分样本通过蛋白印迹检测及实时荧光定量检测CTL和METH海马(Hippocampus,HIP)GLT-1在急性戒断期变化分析甲基苯丙胺对不同脑区GLT-1的影响;一部分样本通过冰冻切片免疫荧光及HE染色检测甲基苯丙胺对神经元的损伤情况;一部分样本通过电镜观察海马神经元线粒体改变。最后,为进一步探讨GLT-1在甲基苯丙胺导致的焦虑情绪中的作用,我们通过甲基苯丙胺成瘾戒断动物模型使用CE处理后,RNA及蛋白水平检测正常对照组、甲基苯丙胺处理组及甲基苯丙胺+头孢曲松干预组的GLT-1的表达情况,证实CE能够上调脑区GLT-1的表达;通过免疫荧光及HE染色探索上调GLT-1表达后海马神经元损伤情况是否得到改善,通过高架十字迷宫和旷场试验测试评价上调GLT-1后对甲基苯丙胺导致的焦虑行为的影响。[结果]1.CPP测试结果显示,5 mg/kg METH处理组小鼠在伴药箱停留的高2.5 mg/kg组,CTL无明显条件位置偏爱,CPP得分有统计学差异(p<0.05)。2.通过HE染色和免疫荧光染色观察发现海马神经元数量减少。3.EPM中小鼠在开放臂停留时间百分比,METH组与对照组相比较存在统计学差异(p=0.021,*p<0.05);OFT中小鼠在通过中间区域的路程,METH组与对照组进行差异分析(p=0.005,**p<0.01);OFT中小鼠进入中间区域的次数,METH组与对照组进行差异分析(p=0.0015,**p<0.01)。4.Western Blot 观察发现海马组织中 GLT-1 表达下降(p=0.0004,***p<0,001)和qPCR(****p<0.0001),GLT-1特异性荧光标记显示海马中GLT-1表达下降。5.WB结果显示,CE干预组较METH组海马GLT-1表达上调(##p<0.01)、qPCR(####p<0.0001),免疫荧光显示海马GLT-1表达增多。6.行为检测显示CE干预组与METH组相比较EPM开放臂停留时间占比(p=0.0105,#p<0.05)和 OFT 外周停留时间(p=0.0182,#p<0.05)降低,存在统计学差异改变,而对中心区探索次数有增加趋势。[结论]1.METH可导致C57BL/6J小鼠成瘾,并产生焦虑症状。2.METH成瘾小鼠导致海马GLT-1的表达下调,造成海马神经元损伤。3.CE上调METH戒断期小鼠海马GLT-1表达能改善METH成瘾小鼠的焦虑症状。