粟酒裂殖酵母Ppr10蛋白的定位及对线粒体蛋白影响的研究

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线粒体是真核生物中非常重要的细胞器之一,它参与ATP的合成以及物质代谢、细胞凋亡等多种生理过程。裂殖酵墨(Schizosaccharomyces pombe, S.pombe)作为一个简单的真核生物的研究模型,在线粒体的转录和翻译研究中应用广泛,作为线粒体的研究模型,裂殖酵母的优势也越来越被关注。线粒体基因组的转录过程是先形成多顺反子,再进行剪切加工,形成成熟的RNA。在多种生物当中,PPR蛋白参与到了线粒体基因组的转录和翻译的过程。PPR蛋白是指含有两个及以上串联重复的PPR模体的蛋白质,而PPR模体则是由35个氨基酸残基组成的结构域。PPR蛋白对单链的RNA具有序列特异性识别模式,与RNA的转录、编辑、剪切和稳定等过程都密切相关。粟酒裂殖酵母的线粒体基因组编码25种tRNA、8种mRNA、2种rR NA和一个rnpB。在本文中,我们研究了一个PPR蛋白在线粒体中发挥的作用。Ppr10蛋白是一个最近被发现的PPR蛋白,通过构建ppr10的敲除菌,我们发现它在富集培养基上生长受到了一定的影响,而当在富集培养基中加入抗霉素A时,Δpprl0菌株的生长受到了剧烈的抑制。这就意味着ppr10基因与线粒体的功能密切相关。通过一系列的研究,我们发现,首先,Ppr10蛋白定位于线粒体中,且位于线粒体内部,是一个可溶性蛋白。PPR蛋白是一类与RNA结合而发挥作用的蛋白,它主要参与线粒体基因组的转录和翻译,根据PPR蛋白的这一特征,我们觉得Ppr10蛋白更可能是一个线粒体基质蛋白。其次,Ppr10蛋白功能的缺失影响了线粒体基因组编码的蛋白的合成。通过体内标记线粒体基因组蛋白的实验我们发现,除了Cob1蛋白外,其他线粒体基因编码的蛋白的合成水平出现了不同程度的降低,尤其是Cox1、Cox2和Atp8,9这几个蛋白。免疫印记分析实验告诉我们,当ppr10基因缺失后,线粒体蛋白Cox1、Cox2、Cox3、Cob1的水平剧烈下降。几乎检测不到。既然ppr10基因敲除之后影响了线粒体基因组编码的蛋白的合成,同时也使得蛋白Cob1变得极不稳定。那么对于核基因组编码的参与构成复合体Ⅳ的蛋白Cox4,是不是也受到了影响呢?我们表达了Cox4蛋白,并送蛋白样品到公司制备了相应的抗体。通过免疫印记分析实验,我们发现Cox4蛋白的水平也出现了一定的降低。因此,我们认为Ppr10蛋白与线粒体功能的发挥密切相关。它通过影响线粒体编码的蛋白的合成从而使得呼吸传递链过程中的复合体瓦解,导致了线粒体功能的缺失。
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