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冠状动脉粥样硬化是冠心病的主要病理基础,研究发现,在动脉粥样硬化斑块中发现大量活化的T淋巴细胞,以CD4+T淋巴细胞为主,CD4+T淋巴细胞介导的免疫反应参与了冠状动脉动脉粥样硬化(Coronary artery atherosclerosis,)的发生、发展过程。经皮冠状动脉介入治疗术(percutaneous coronary intervention, PCI)是目前公认的一种治疗冠心病的先进而有效的手段,但术后心肌损伤仍是临床常见而棘手的并发症。PCI可诱发或促进不稳定斑块破裂,导致外周血淋巴细胞的显著激活,促进心肌局部炎症的发生发展。因此,炎症反应和CD4+T淋巴细胞参与PCI术后心肌损伤的过程。ARMYDA系列研究结果表明,PCI术前给予80mg大剂量的他汀,可以有效的降低炎症指标CRP水平,保护心肌,明显改善患者预后,该效益可能归因于阿托伐他汀抗炎作用。研究发现,阿托伐他汀能够抑制T淋巴细胞细胞的生长、活性,调整CD4+T淋巴细胞亚型Th1/Th2细胞分泌促炎因子和抗炎因子趋于平衡。因此,强化他汀防治PCI术后心肌损伤可能是通过其免疫调节作用介导的,但具体机制尚需探讨。微小核糖核酸(MicroRNA, miRNA)是近年来发现的一类长约18～22个核苷酸的小分子RNA,存在于基因组的非编码区,通过转录后调节靶基因从而参与调节细胞增生、分化、凋亡等过程。新近研究证实,miRNA-21具有心肌保护作用,并在调控免疫炎症反应中具有重要的作用。研究发现在CD4+T淋巴细胞中miRNA-21可以负调控其靶蛋白PDCD4,抑制过度激活的炎症反应。因此我们设想强化阿托伐他汀防治冠脉介入治疗术后心肌损伤可能通过免疫调控CD4+T淋巴细胞miRNA-21表达而起效,因此本课题拟通过研究强化阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者PCI围术期CD4+T淋巴细胞miRNA-21表达的影响及体外不同剂量阿托伐他汀干预对其变化的影响,在miRNA基因水平上探讨强化阿托伐他汀减少PCI术后心肌损伤的可能机制。第一部分CD4+T淋巴细胞表达microRNA-21在强化阿托伐他汀减少冠脉介入治疗术后心肌损伤的作用目的探讨强化他汀对不稳定心绞痛患者PCI围术期CD4+T淋巴细胞微小核糖核酸一21(microRNA-21, miRNA-21)表达的影响,从而为PCI术后心肌损伤的临床防治提供理论依据。方法入选2011年11月至2012年5月在我院住院行择期PCI术的UAP患者68例,随机分为强化他汀组(术前80mg/d,术后40mg/d,n=34),和常规他汀组(术前术后均20mg/d,n=34)。分别于PCI术前、术后16-24h抽取新鲜外周血,并检测CK-MB、CTnI、hs-CRP,根据密度梯度离心法分离出两组患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),运用免疫磁珠法(Magnetic cell sorting system, MACS)进一步分离出CD4+T淋巴细胞；荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)检测miRNA-21及程序性细胞死亡因子4(programmed cell death4, PDCD4) mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western-Blot)检测PDCD4蛋白表达,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay, Elisa)检测培养基上清液肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-α, TNF-α)及白细胞介素-10(interleukins--10, IL-10)浓度。结果①两组cTnI、CK-MB及hs-CRP较术前有所升高,但强化他汀组升高的幅度显著低于常规他汀组(P<0.05)；②与术前强化他汀组相比,术后强化他汀组miRNA-21表达显著增加,PDCD4mRNA、PDCD4蛋白相对表达量及血清TNF-α浓度显著降低,血清IL-10浓度增加(均P<0.05)；③与术前常规他汀组相比,术后常规他汀组PDCD4mRNA、PDCD4蛋白及TNF-α浓度明显升高(均P<0.05), miRNA-21和IL-I0表达则无明显变化(均P>0.05)。结论强化阿托伐他汀可以上调PCI术后CD4+T淋巴细胞miRNA-21表达,导致其靶蛋白PDCD4表达减少,从而减轻PCI术后心肌损伤。第二部分阿托伐他汀对体外人CD4+T淋巴细胞微小核糖核酸-21表达的影响目的研究阿托伐他汀在体外对人CD4+T淋巴细胞微小核糖核酸-21表达的影响,从而探讨阿托伐他汀的免疫调节机制。方法取12例健康志愿者的新鲜外周血,免疫磁珠法分离出CD4+T淋巴细胞,分为1640组、PHA+0μmol/1他汀组、PHA+1μmol/1他汀组、PHA+10μmol/1他汀组,细胞增殖-毒性试验检测细胞活性。体外培养48h后收集各组细胞及培养基上清液。荧光定量聚合酶链反应检测miRNA-21及PDCD4mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测PDCD4蛋白表达,酶联免疫吸附测定检测培养基上清液TNF-α及IL-10浓度。结果①与1640组相比,PHA+0μmol/1他汀组细胞培养基上清TNF-α浓度升高(P<0.05)。CD4+T淋巴细胞miRNA-21、PDCD4mRNA及PDCD4蛋白表达均上调(均P＜0.05)。②相比PHA+0μmol/1他汀组,PHA+10μmol/l他汀组的CD4+T淋巴细胞miRNA-21表达量和培养基上清IL-10浓度增加,PDCD4蛋白表达和TNF-α浓度明显降低(均P＜0.05)。结论阿托伐他汀能抑制CD4+T淋巴细胞增殖活性,促进CD4+T淋巴细胞miRNA-21的表达增加,从而抑制靶蛋白PDCD4,促进抗炎因子IL-10分泌和抑制促炎因子TNF-α。