目的:构建人抗缪勒管激素融合蛋白的原核表达系统（pET28a-hAMH），诱导表达hAMH重组蛋白，研究hAMH重组蛋白对卵巢癌细胞（SKOV3）增殖凋亡的影响，探讨联合检测血清β-hCG、CA125和HE4在卵巢癌早期诊断中的意义。
　　方法:利用质粒载体pET28a，小规模提取大肠杆菌携带的质粒DNA，经DNA限制性内切酶消化以产生粘性末端，hAMH活性结构域表达序列通过PCR反应得到，利用琼脂糖电泳分离纯化、回收pET28a酶切产物和hAMHPCR产物后，由T4DNA连接酶催化连接反应，随后转化到大肠杆菌DH5α，通过PCR反应鉴定正确克隆并测序；对重组质粒进行测序,并将测序正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21感受态细胞，表达hAMH蛋白，扩大培养，镍（Ni）亲和层析柱纯化表达的蛋白，脱盐、去除内毒素；采用浓度为25、50、100、200、400nmol/L重组人AMH处理对数生长期的SKOV3细胞，并设0.0001、0.01、1、10、100nmol/L阿霉素组为阳性对照组，同时设3个阴性对照孔（阿霉素和AMH浓度0nmol/L），作用72小时后通过CCK-8法检测SKOV3细胞增殖抑制率；采用重组人AMH100nmol/L作用于SKOV3细胞48小时后使用Annexin-V和PI染色，并设1nmol/L阿霉素组为阳性对照组，同时设3个阴性对照孔（阿霉素和AMH浓度0nmol/L），通过流式细胞检测AMH对SKOV3细胞的促凋亡作用。；选取已确诊的卵巢癌患者43例为恶性组，良性卵巢肿瘤患者33例为良性组，健康体检女性47例为对照组，用化学发光法检测其血清CA125、HE4、β-hCG和AMH水平，并进行统计分析其在卵巢癌早期诊断中的意义。
　　结果:分子克隆技术成功构建了原核表达载体pET28a-hAMH并实现了hAMH融合蛋白的Ni亲和层析高纯度纯化，实现了hAMH融合蛋白在大肠杆菌BL21中的可溶性表达；100、200、400nmol/LAMH对SKOV细胞增殖抑制率分别为50.6%、64.5%、78.3%，与阴性对照组相比有统计学意义(P<0.01)，且随AMH浓度加大，抑制效果明显提高；流式细胞仪检测AMH组SKOV3细胞总凋亡率为(30.6±2.82)%，与阴性对照组比较，细胞凋亡率明显升高，有统计学意义（P<0.01）；CA125/HE4/AMH联合检测的ROC曲线下面积（AUC）为0.95，与CA125/HE4/β-hCG/AMH相同，优于传统的CA125/HE4二联检（AUC=0.91）。
　　结论:构建了原核表达载体pET28a-hAMH并实现了hAMH融合蛋白在大肠杆菌的可溶性表达及高纯度纯化；hAMH融合蛋白可抑制SKOV3细胞的增殖，促进其凋亡；血清学hAMH、HE4、CA125联合检测（AUC0.95）优于单项检测和其它多项联合检测，敏感性达97.7%，比传统CA125/HE4组合提高了11.7%，明显提高了卵巢癌早期诊断的检出率。