研究背景：自从1992年病毒性乙型肝炎疫苗在我国被纳入儿童计划免疫，低年龄组儿童人群HBV阳性检出率逐年下降，但与此同时，由疫苗免疫压力引发的HBV “a”抗原决定簇变异株的出现和流行，越来越受到了人们的广泛关注，但是对江西地区免疫儿童感染的HBV “a”抗原决定簇变异情况的研究还未见报道。研究目的：本研究拟调查1996年后出生的乙肝疫苗免疫儿童HBV的感染，分析所感染的HBV S基因“a”抗原决定簇的变异，寻找可能与免疫逃避相关的变异位点，并鉴定HBV基因型和血清型，为诊疗和预防儿童HBV感染提供重要参考。研究方法：1.临床标本筛选：收集在江西省儿童医院就医的全程乙肝疫苗免疫儿童血清标本，ELISA方法检测HBV-M，筛选出HBV感染的阳性标本。2. HBＶ感染的统计学分析：采用x2检验分析不同年龄、性别组间免疫儿童的HBsAg阳性率的差异。3. HBV S基因的PCR扩增与测序：采用高保真PCR方法对HBsAg阳性血清进行HBV S区基因DNA扩增，PCR产物直接测序。4.“a”抗原决定簇变异位点分析：采用DNAman软件对所测HBV S基因的核苷酸和氨基酸序列与参考序列进行比对以分析血清型和“a”决定簇的变异。5. HBV基因型的鉴定：采用Editseq软件、Clustalx(1.83)软件和Mega4软件绘制S基因遗传进化树和使用在线Genotyping软件与参考序列比对以鉴定基因型。研究结果：1.标本采集：研究者于2010年6月-2011年5月间在江西省儿童医院采集就医的乙肝疫苗全程免疫儿童(7.39±3.66岁)血清标本13117份，男童7139人(54.42%)，女童5978人(45.58%)。2. HBsAg感染分析：从13117份血清标本中共筛选出230份HBsAg阳性标本，HBsAg阳性率为1.75%，男女儿童HBsAg阳性率分别为1.78%和1.72%，两者间的HBsAg阳性率差异不明显（P>0.05）；每5岁设置的不同年龄段儿童HBsAg阳性率分别为1.80%、1.53%和2.00%，三者之间没有明显差异（P>0.05）；同一年龄段不同性别间免疫儿童HBsAg阳性率差异无统计学意义（P>0.05）。3.“a”抗原决定簇突变位点的检测：从230份HBsAg阳性标本成功扩增并测序了118份HBV S区基因，从中检测出24份标本有“a”抗原决定簇变异，变异率20.34%。在“a”决定簇中共发现了7个位点8种错义突变，分别为I126T/S，P127T，Q129H，S132T，P142T，S143T和G145A。HBV “a”抗原决定簇两茎环间的变异率和男女儿童感染的“a”抗原决定簇的变异率无显著性差异（P>0.05）。4.血清型分析：氨基酸序列比对分析发现，118标本中，105份为adw血清型，均为adw2亚型；7份为ayw血清型，均为ayw1亚型；6份为adr血清型，adrq+4份，adrq-2份。5.基因型分析：进化树分析与在线Genotyping软件检测结果显示，118标本中，112份为HBV B基因型，占94.92%，都是B2亚型；6份为HBV C基因型，占5.08%，其中4份为C2亚型，2份为C3亚型。基因型分布在不同性别间无明显差异（P>0.05），基因型和血清型之间未反映出异质性，存在一定的关联。研究结论：1.从1992年起将乙肝疫苗纳入儿童计划免疫管理后，江西地区儿童HBsAg阳性率有了明显的下降，低于乙肝疫苗纳入计划免疫前的儿童HBsAg阳性率。2.在江西地区乙肝疫苗免疫儿童人群检测出“a”抗原决定簇变异的HBV感染，但并未发现有明显优势的变异株类型，提示S基因中“a”决定簇的某些位点变异可能是逃避乙肝疫苗免疫导致HBV感染的机制之一。3.江西地区乙肝疫苗免疫儿童感染的HBV以adw血清型为主，并有ayw血清型和adr血清型存在。4.江西地区乙肝疫苗免疫儿童感染的HBV以B基因型中B2基因亚型为主，有少量的C基因型（C2基因亚型和C3基因亚型）；该地区儿童感染的HBV遗传距离近。