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目的以3T3-L1脂肪细胞为模型探讨DHA对前体脂肪细胞和成熟脂肪细胞凋亡的影响及其机制,为应用DHA进行肥胖的防治提供科学依据。方法3T3-L1前脂肪细胞常规培养,MTT法检测DHA处理24、48、72h对3T3-L1前脂肪细胞活力的影响,流式细胞术检测DHA作用24h对前脂肪细胞周期的影响,Hoechst染色法观察DHA处理24h对前脂肪细胞凋亡的影响,线粒体膜电位JC-1染色法检测DHA处理24h前脂肪细胞线粒体膜电位的改变,蛋白免疫印迹法检测DHA处理对前脂肪细胞中p-ERK1/2、p21、Bcl-2、Bax和p53蛋白水平的影响,试剂盒法检测DHA处理后前脂肪细胞凋亡效应因子Caspase 3的活性变化,从而探讨DHA对前脂肪细胞凋亡的影响及其作用机制。MDI法诱导前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞并进行以下检测:MTT法检测DHA处理对成熟脂肪细胞活力的影响,油红O染色法测定DHA处理48h对成熟脂肪细胞脂质含量的影响,Hoechst染色法观察DHA处理48h对成熟脂肪细胞凋亡的影响,JC-1染色法检测DHA处理24h成熟脂肪细胞线粒体膜电位的改变,蛋白免疫印迹法检测DHA处理对成熟脂肪细胞凋亡相关蛋白Akt、p-Akt、CREB、ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax和Bad水平的影响,试剂盒法检测DHA处理48h对成熟脂肪细胞凋亡效应因子Caspase 3活性的影响,从而研究DHA对成熟脂肪细胞凋亡的影响及其作用机制。结果MTT结果表明DHA可降低3T3-L1前脂肪细胞的活力。对3T3-L1前脂肪细胞周期的研究发现,DHA能诱导前脂肪细胞G2/M期阻滞,增强ERK1/2的活化、上调p21的表达。Hoechst染色显示DHA可诱导3T3-L1前脂肪细胞凋亡,JC-1染色表明DHA可降低线粒体膜电位,蛋白免疫印迹分析发现DHA可上调凋亡相关蛋白p53表达、降低Bcl-2/Bax比值。同时发现DHA可增强前脂肪细胞凋亡效应因子Caspase 3的活性。对成熟脂肪细胞的研究发现,DHA可降低3T3-L1成熟脂肪细胞的活力、降低脂质含量,Hoechst染色结果显示DHA能诱导3T3-L1成熟脂肪细胞凋亡,JC-1染色表明DHA处理24h可降低成熟脂肪细胞的线粒体膜电位,蛋白免疫印迹分析发现DHA可降低Bcl-2/Bax比值、抑制成熟脂肪细胞抗凋亡蛋白Akt和ERK1/2的活化、抑制CREB表达,上调促凋亡蛋白Bad水平,还发现DHA可增强成熟脂肪细胞凋亡效应因子Caspase 3的活性。结论DHA可激活ERK1/2/p21途径诱导G2/M期阻滞,抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,并通过上调p53表达、降低Bcl-2/Bax比值、升高Caspase 3活性,诱导前脂肪细胞凋亡。DHA通过抑制Akt/CREB和ERK途径、降低Bcl-2/Bax比值、上调促凋亡蛋白Bad水平、升高Caspase 3活性,诱导成熟脂肪细胞凋亡。