茶树低温应答相关转录因子CsICE1和CsCBF1的研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 20次 | 上传用户:Zeshawn
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植物遭受低温胁迫时,CBF转录因子通过与CRT/DRE顺式作用元件结合来激活下游一系列冷诱导基因的转录表达,从而提高植物的抗寒性。ICE1是CBF上游的主要激活因子。为了阐明茶树应答低温的分子基础和调控机理,从整体水平上提高茶树的抗寒性,并且为鉴定和选育茶树抗寒品种提供分子水平上的理论依据,本论文进行了以下研究:(1)根据一段与拟南芥ICE1基因同源性较高的茶树EST,采用RACE技术获得了茶树ICE1基因的cDNA全长,命名为CsICE1。该基因(1964bp)与其同系物一样都含有保守的bHLH(碱性螺旋-环-螺旋)结构域和C端区域。(2)根据GenBank上已有的序列信息,在茶树中克隆出一个CBF基因,命名为CsCBF1。该基因(1210bp)含有CBF转录因子家族典型的结构域:AP2和其两侧的保守特征序列。(3)通过实时荧光定量PCR和半定量RT-PCR检测CsICE1和CsCBF1在低温诱导条件下的表达模式,发现与拟南芥的ICE1和CBF表达模式相似。即:CsICE1在4℃处理后与20℃相比转录水平几乎没有变化;CsCBF1在常温下(20℃)不表达,4℃处理后表达量快速而明显大幅增加。(4)通过原核表达并纯化得到带有6个组氨酸标签的CsCBF1融合蛋白。(5)采用凝胶迁移分析技术(EMSA)证明了CsCBF1蛋白可以与CRT/DRE顺式作用元件特异性地结合。以上的研究结果表明:ICE1-CBF冷调控途径存在于茶树中,并且在茶树低温应答过程中起着关键作用。CsICE1和CsCBF1两个转录因子对提高茶树抗寒性起着重要的作用。
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