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第一部分C21甾体MT2纳米乳球的制备及其逆转肿瘤细胞紫杉醇耐药的研究研究目的针对抗癌药物紫杉醇(paclitaxel,PTX)以及源自中药通光散的化疗增敏活性分子MT2[11α-O-2-甲基丁酰基-12 β-0-(E)-2-甲基丁烯酰基-通光散苷元乙]均存在水溶性差的问题,本课题利用纳米制剂载体材料二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)对紫杉醇和MT2进行包裹,以期得到一种高载药量和良好稳定性的载药纳米粒,通过MT2对肿瘤细胞紫杉醇耐药性的逆转作用,提高紫杉醇在耐药肿瘤细胞的抗肿瘤活性。研究方法(1)利用二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)对MT2和紫杉醇进行包裹,并采用激光粒度仪(DLS)、透射电镜(TEM)对所得纳米乳球进行形态学表征。(2)利用HPLC等方法对纳米乳球的药物包载量进行研究。(3)体外药效评价:SRB检测法测定原料药、纳米乳球以及其联合用药对耐药肿瘤细胞(Hela/taxol)增殖的半数抑制浓度值(IC50),评价纳米乳球的体外抗肿瘤增效作用。研究结果(1)制备了一种具有高载药量的纳米乳球,MT2包封率为(80.6±5.12)%,紫杉醇包封率为(83.7±4.23)%。MT2纳米乳球粒径为(114±8.0)nm,紫杉醇纳米乳球粒径为(73.45 ± 5.35)nm。(2)体外药效评价:在MT2联合紫杉醇/紫杉醇纳米乳球(PTX NP)用药时,紫杉醇纳米乳球的IC50是0.19 nM;而紫杉醇的IC50为10.32 nM,前者效果比后者强了54倍!说明MT2+PTX NP对耐药肿瘤细胞HeLa/Tax的生长抑制效果强于MT2+PTX;紫杉醇和MT2单独包裹或者共同包裹联合用药对耐药肿瘤细胞的生长抑制率基本一致,(PTX-MT2)NP 的 IC50值为 4.95 μM,PTX NP+MT2 NP 的 IC50值为 6.04 μM。结论本课题创制了一种高载药量和良好稳定性的紫杉醇-MT2纳米乳球[(PTX-MT2)NP]。体外抗肿瘤活性测试表明:将紫杉醇和MT2共同包裹或者单独包裹对耐药肿瘤细胞的生长抑制率基本一致,共同包裹形成的(PTX-MT2)NP具有稍优于单独包裹的抗肿瘤效果。第二部分新型荧光探针DCFHA的合成及其用于血红素与血迹快速检测的研究研究目的血红素作为一种重要的原卟啉IX-Fe配合物,在许多生物学过程中都起着非常重要的作用。此外,血红素及其衍生物被认为是区分血液与其他有色样品的生化标记。本研究的目的在于发展一种新的荧光探针实现血红素快速的、灵敏的、且肉眼可见的荧光检测。在此基础上,制备青蒿素/探针共载的简易试纸条,以实现血红素和血迹的快速鉴定。研究方法(1)将2’,7’-二氯荧光素(DCF)作为染料来制备荧光报告分子,通过简捷的缩合反应和还原反应两个步骤合成了一种新的非荧光的二氢荧光素酰胺衍生物(DCFHA),产物经柱层析纯化和1H NMR和13C NMR等分析方法鉴定化合物结构;(2)血红素催化过氧化物产生超氧自由基阴离子(O2·-),进而将非荧光二氢荧光素(DCFHA)氧化为荧光形式。我们分别以双氧水(H202),叔丁基过氧化氢(TBHP)和青蒿素(ART)作为氧源,探讨了血红素的催化反应,并记录探针分子荧光开启情况。并将DCFHA/H202体系用于区分血迹和咖啡迹。(3)利用中药来源的有机过氧化物青蒿素(ART)具有较好的稳定性、便于保存等特点,通过将ART和DCFHA都掺入滤纸(型号:中速102)中,制备一种简单的试纸条,并将该试纸条用于血迹的检测。研究结果(1)通过1H NMR和13C NMR等分析方法,鉴定出反应产物结构为:2-(2,7-二氯-3,6-二羟基-9H-黄嘌呤-9-基)-N,N-二乙基苯甲酰胺(DCFHA)。(2)H202,TBHP和ART在血红素催化下产生反应性自由基超氧自由基阴离子(O2·-,可使非荧光二氢荧光素(DCFHA)氧化为其荧光产物(DCFA)。经测试,DCFHA的检测限(LOD)可达皮摩尔水平:DCFHA/H2O2,DCFHA/TBHP和DCFHA/ART系统分别为64 pM,350 pM,420 pM。DCFHA/H202体系对于微量血渍存在下有显著增加的绿色荧光,而对于咖啡渍则存在下无荧光产生。(3)DCFHA/ART试纸对检测痕量血液表现出良好的灵敏度和选择性,可基于肉眼观察辨别血红素和血液荧光检测。并且DCFHA/ART试纸具有良好稳定性。结论我们报告了一种新型的荧光测定法,可以直接检测血红素。该检测基于血红素催化过氧化物产生的活性氧自由基,再进一步将非荧光DCFHA氧化为其荧光产物DCFA。将三种过氧化物H202,TBHP和ART与Britton-Robinson(BR)溶液中的DCFHA分别混合以形成检测试剂。这三种系统均具有灵敏检测血红素的巨大潜力,检测限低至皮摩尔水平。还对DCFHA/H2O2溶液进行了评估,以区分血迹和咖啡迹。在微量血液存在下显著增加的绿色荧光不仅为定量评估提供了机会,而且为在紫外光下肉眼观察提供了方便。此外,将ART和DCFHA都掺入滤纸条制备青蒿素/探针共载的简易试纸条,可实现血红素和血迹的快速鉴定。