鸡源致病性大肠埃希菌耐药基因及毒力基因检测研究

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鸡大肠杆菌病是由致病性大肠埃希菌(Escherichia coli)引起的细菌性传染病。近年来,该病已成为危害养鸡业的主要传染病之一,给养鸡业造成极大的损失。本实验室1992-2011年从我国陕西省、河南省、河北省、山西省、甘肃省和宁夏自治区6省区分离保存320株鸡源致病性E.coli。本研究对其进行耐药性和质粒介导的耐药基因及毒力相关基因检测,以了解E.coli耐药性变化、质粒介导的耐药基因和毒力基因携带情况、耐药基因与耐药性及毒力基因与致病性的相关性,为减少耐药菌的产生、防止人兽共患病原菌间耐药性的传递及临床合理使用药物提供理论依据,同时为阐明鸡源致病性E.coli的致病机理提供科学数据。1.参照CLSI(clinical and laboratory standards institute)推荐的K-B药敏纸片法对320株鸡源致病性E.coli分离株进行18种常用抗菌药物的敏感性试验。结果显示,1992-2011年分离株对氨苄青霉素、四环素、强力霉素和诺氟沙星的耐药率一直在60%以上;对阿米卡星一直低于20%。对头孢他啶、卡那霉素、妥布霉素、氟苯尼考、萘啶酸和环丙沙星的耐药性呈不同程度的上升趋势,其中对萘啶酸的耐药率已上升到100%;对庆大霉素的耐药率有下降趋势。菌株均表现出多重耐药性(耐3种以上抗菌药物),其中以8耐菌株最多,达21.6%(69/320);8重以上耐药菌株达63.4%(203/320)。结果表明,我国6省区鸡源致病性E.coli分离株耐药现象严重,且以多重耐药为主,耐药率高达100%。2.采用PCR方法,对320株致病性E.coli分离株进行20种质粒介导的耐药基因的检测。结果显示,分离株中共检测到9种耐药基因,所得的片段与预期一致,且基因序列与GeneBank中公布的序列相似性达96%以上。1992-2011年6省区E.coli分离株中耐药基因tetB、tetA和aac(3)-II的检出率一直高于40%,floR、cmlA、aph(3’)-I和blaTEM的检出率分别由1992-1995年的4.0%、4.0%、18.0%和70.0%上升到2008-2011年的18.2%、19.3%、36.4%和98.9%。结果表明,我国6省区鸡源致病性E.coli耐药基因携带率较高,耐药基因aph(3’)-I的检出与菌株的耐药表型呈明显相关性(P<0.05);耐药基因tetA、tetB、blaTEM和aac-II的检出与菌株的耐药表型呈极显著相关性(P<0.01)。3.采用PCR方法,对320株致病性E.coli分离株进行18种毒力基因的检测。结果显示,分离株中共检测到13种毒力基因,所得的片段与预期一致,且基因序列与GeneBank中公布的序列相似性达98%以上。毒力基因colBM(100%)的检出率最高,hlyA(0.6%)的检出率最低,其中基因irp2、fyuA、iucA、iutA、fimA、papC、iss、tsh和colV在高致病性E.coli分离株中的检出率极显著高于在中、低两种致病性E.coli分离株中的检出率(P<0.01)。193株高致病性分离株均同时携带8-12种毒力基因,其中有14株菌株同时携带12种基因,占菌株的7.3%(14/193);98株中等致病性分离株均同时携带5-8种毒力基因;29株低致病性分离株均同时携带2-4种毒力基因。毒力基因irp2+fyuA组合的检出率高达60.9%(195/320)。结果显示,我国6省区鸡源致病性E.coli分离株毒力基因检出率高,且携带毒力基因的数量与菌株的致病性呈正相关。
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