逼尿肌功能障碍引起的尿频、尿急、尿失禁和遗尿在临床上极为常见，逼尿肌不稳定(detrusor instability, DI)是产生逼尿肌功能异常的最主要原因。由于目前逼尿肌不稳定的发病机理尚未明确，因此，在临床治疗上极为棘手。膀胱逼尿肌的舒缩活动是受神经系统支配的，其精细复杂的功能调节是由多种因素共同完成的，乙酰胆碱能、肾上腺素能、VIP、P物质等神经递质都参与这一活动。影响膀胱功能的主要因素包括逼尿肌收缩性、兴奋性和膀胱顺应性三个方面；其中，胆碱能M受体(MR)是逼尿肌收缩功能的最重要的调节因素，但临床工作中使用抗胆碱能药物治疗DI效果不理想，且副作用明显。肾上腺素能β受体(β-AR)是调节膀胱逼尿肌舒张功能最重要的因素。许多动物及人膀胱逼尿肌细胞都存在三种β-AR亚型：β1-AR、β2-AR及β3-AR。膀胱逼尿肌上β-AR亚型分布数量有种属特异性，目前认为至少在人和大鼠中，β3-AR介导逼尿肌舒张作用占绝对优势。现阶段研究主要集中在两个方面：一是利用β受体活性介质从功能上观察β受体及亚型对逼尿肌松弛作用的影响；二是从核酸表达方面研究β-AR亚型在膀胱的分布情况。目前对于β-AR各亚型在不同种属膀胱逼尿肌的分布和功能情况尚无定论；β受体不同亚型的分布和调节的功能有所不同，可能与其信号转导机制不完全相同有关，因此，关于β-AR的信号转导机制应深入研究到亚型水平，而β3-AR是调节许多动物包括人类逼尿肌舒张的主要β受体亚型，但现有资料未见β3-AR介导逼尿肌舒张的分子传导机制的报道；同时β3-AR与逼尿肌不稳定关系未见报道。研究目的：(1)离体逼尿肌条拉力实验观察β-AR对正常大鼠逼尿肌舒张功能、兴奋性的影响；(2)RT-PCR和放射配基结合实验检测β-AR及亚型在逼尿肌的分布情况；(3)观察逼尿肌不稳定时β3-AR分布数量及调节膀胱兴奋性、收缩性和顺应性功能的变化；(4)在此基础上探讨β3-AR调节逼尿肌舒张功能的分子机制，为分析多种膀胱功能障碍的原因提供新的内容。主要结果和结论如下：1. 离体逼尿肌条拉力实验测定β-AR及亚型活性介质对逼尿肌舒张作用的影<WP=9>响，结果显示β-AR及亚型激动剂均呈浓度依赖性地抑制KCl诱导的逼尿肌条收缩，β3-AR激动剂作用大于β1、β2-AR；低浓度β3-AR拮抗剂和较高浓度β1、β2-AR拮抗剂均能抑制ISO对逼尿肌的舒张作用。提示β受体三种亚型均参与大鼠逼尿肌舒张功能的调节，其中β3-AR起主要作用；2. 在一定的前负荷下，逼尿肌体外肌条仍可产生自发性收缩，而且β-AR及各亚型拮抗剂对逼尿肌自发性收缩频率均无明显影响，提示逼尿肌的自发性收缩并不依赖于β-AR；β-AR激动剂能明显抑制大鼠逼尿肌条的自发性收缩频率，且β-AR对大鼠逼尿肌自律性的影响主要通过β3-AR亚型。3. 采用RT-PCR法检测到在大鼠膀胱逼尿肌，β1、β2、β3三种受体mRNA均有表达；其中β3-AR mRNA的含量明显大于β1及β2-AR，约占总β-AR的70%，证实β3-AR是大鼠逼尿肌β-AR的主要亚型。4. 首次采用放射配基结合实验直接检测大鼠逼尿肌上β3-AR的蛋白含量，结果显示β3-AR蛋白含量占总β受体蛋白的78%，进一步说明大鼠逼尿肌中分布的β受体主要是β3-AR。5. 首次发现逼尿肌不稳定膀胱β及β3-AR密度均降低，β3-AR下降更明显，推测膀胱逼尿肌β-AR数量的减少在逼尿肌不稳定发生发展中可能起一定的作用，β3-AR数量的减少可能与逼尿肌不稳定的关系更密切；而β3-AR mRNA含量的减少可能是逼尿肌不稳定时β3-AR数量减少的原因之一。 6. β3-AR激动剂抑制DI逼尿肌肌条收缩性及兴奋性的作用较正常逼尿肌减弱，这与放射配基结合及RT-PCR检测结果一致；而β3-AR激动剂仍能抑制DI逼尿肌条收缩力、兴奋性，增加DI膀胱最大容量及顺应性，推测特异性β3-AR激动剂可能是临床治疗逼尿肌不稳定的关键之一。7. 首次发现cAMP特异性阻滞剂SQ-22,536对BRL37344A介导的逼尿肌细胞松弛作用无明显抑制作用，而BRL37344A刺激β3-AR对逼尿肌细胞内cAMP及cGMP水平均无明显影响，提示β3-AR调节逼尿肌舒张不依赖cAMP途径，可能是通过激活Gsα，促使钾离子通道开放等途径来调节；而ISO能增加细胞内cAMP含量，SQ-22,536部分抑制ISO对逼尿肌细胞的松弛作用，提示ISO调节逼尿肌舒张通过依赖AC-cAMP和不依赖cAMP多种信号转导途径，而依赖AC-cAMP信号途径可能与β-AR的β1、β2-AR亚型有关。8. 首次发现PKA的特异性阻滞剂H-89可抑制ISO介导的逼尿肌细胞松弛作用，但不能完全阻滞ISO调节逼尿肌的舒张作用；而H-89对BRL 37344A介导的逼尿肌细胞松弛作用无明显影响，提示cAMP-PKA信号转导途径没有参与β3-AR介导逼尿肌舒张，但该途径可能是调节ISO调节逼尿肌舒张的一个次要信号转导途径。<WP=10>9. 首次发现β3-AR激动剂BRL37344A能抑制KCl诱发的钙离子跨膜内流，提示BRL37344A可抑制电压门控钙通道的开放，减少钙离子跨膜内流，从而抑制逼尿肌的收缩；而BRL37344A对caffeine诱发的细胞内钙荧光强度的升高无明显影响，表明胞内钙库RyR钙通道在β3-AR介导的逼尿肌舒张功能中的作用不大。10. β3-AR激活后细胞内活性CaM含量明显增加，表明Ca