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目的:谷氨酰胺(Glutamine,Gin)相关研究是营养和代谢领域最为关注的研究课题之一。本文进行Gin相关研究以期待对危重病人以及危重新生儿进行更好的营养支持。我们利用MS(methionine sulfoximine),人为造成新生幼鼠体内Gin缺乏来模拟新生儿出生后低Gln的状态从而进行肠道改变的研究,在母鼠喂养条件下造成新生大鼠谷氨酰胺缺乏后,观察新生鼠胃肠道改变。在此基础上,利用内毒素造成新生大鼠内毒素血症,观察谷氨酰胺对胃肠道结构和功能的保护情况。
方法:
第一部分实验购买清洁级的SD母鼠及新生鼠共5窝。每1窝为一组,并按照试验要求随机分组研究,新生小鼠进行标记,每天进行称重。分组情况:第1组母鼠分娩后第3天起不用MS×6天+新生幼鼠生后第3天起不用MS×6天;
第2组母鼠分娩后第3天起腹腔注射MS×6天+新生幼鼠生后不用MS×6天;
第3组母鼠分娩后第1天起腹腔注射MS×6天+新生幼鼠生后不用MS×6天;
第4组母鼠分娩后第3天起腹腔注射MS×6天+新生幼鼠生后第3天起腹腔注射MS×6天;
第5组母鼠分娩后不用MS×6天+新生幼鼠生后3天起腹腔注射MS×6天;
实验进行到第7天,在称量后处死新生幼鼠,取材分别在光镜和电镜下观察胃肠粘膜的结构变化,同时测定肠上皮细胞膜脂质流动性。
第二部分实验购买清洁级的SD母鼠及新生鼠共4窝。每1窝为一组,并按照试验要求随机分组研究,新生小鼠进行标记,每天进行称重。分组情况:取第一部分实验中的第4组(母鼠分娩后第3天起腹腔注射MS+新生幼鼠生后第3天起腹腔注射MS)重新做动物模型(谷氨酰胺完全缺乏模型),并作为实验组,正常喂养幼鼠作为对照组。
第1组:实验组+生后第3天起腹腔注射Gln×6天+6天后LPS腹腔注射;
第2组:实验组+生后第3天起不腹腔注射Gln×6天+6天后LPS腹腔注射;
第3组:对照组+生后第3天起腹腔注射Gln×6天+6天后LPS腹腔注射;
第4组:对照组+生后第3天起不腹腔注射Gln×6天+6天后LPS腹腔注射;
实验进行到第7天,在腹腔注射LPS后6小时称量体重,然后处死新生幼鼠,取材分别在光镜和电镜下观察胃肠粘膜的结构变化,同时测定肠上皮细胞膜脂质流动性。
结果:第一部分实验中,经过对5组新生幼鼠的不同处理方式,造成了各组之间肠道形态结构的显著变化。第1组作为正常对照组与其余4组相比,肠道绒毛和微绒毛最完整,排列最为整齐不杂乱,且肠上皮细胞膜流动性最好。相反,第4组由于母鼠和新生幼鼠同时进行MS腹腔注射,对于新生幼鼠而言内源性和外源性来源的Gln同时受到抑制,肠道绒毛和微绒毛的完整性也最差,排列最杂乱,肠上皮细胞膜流动性也最差。另外3组的改变介于上述两组之间。
第二部分实验中,内毒素血症情况下,4组新生幼鼠采取不同处理方式,各组之间肠道形态结构亦变化显著。第2组作为典型实验组与其余3组相比,幼鼠肠上皮细胞膜流动性最差,肠道绒毛的排列最杂乱,肠粘膜结构和微绒毛的超微结构最不完整,肠道功能受损明显。第1组由于额外补充外源性Gln,上皮细胞膜流动性有改善,肠黏膜损伤程度减轻,绒毛有修复。第3和4组比较,两组肠道改变情况相似,没有显著差别,但较前两组损伤明显较轻。
结论:(1)实验证实,不同程度谷氨酰胺缺乏确实可以造成新生大鼠胃肠道形态结构和功能改变;(2)可以选择第一部分实验中变化最为明显的第4组,即母鼠分娩后第3天新生幼鼠生后第3天起均腹腔注射MS6天,在母鼠喂养条件下建立起谷氨酰胺缺乏的新生动物模型;(3)通过谷氨酰胺缺乏的新生动物模型,本实验初步证实补充谷氨酰胺可以保护内毒素血症大鼠的胃肠道形态结构和功能。