B淋巴细胞刺激因子及其全人源性抗体的表达和性质研究

来源 :南京师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dilanmeng
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B 淋巴细胞刺激因子(BAFF)属于肿瘤坏死因子超家族的成员,在刺激B 细胞增殖及成熟方面具有重要作用。BAFF在anti-IgM 存在的情况下能专一刺激B细胞的增殖和分化,因而在体液免疫中发挥重要的调节作用,特别是对T1 期B淋巴细胞的正常发育、脾脏生发中心的形成和免疫球蛋白的分泌尤为重要。其缺陷和过度表达均能引起机体免疫失衡,从而诱发多种自身免疫性疾病。同时BAFF 也是某些B 细胞淋巴瘤的存活因子。因此,BAFF 抑制剂的开发有望成为治疗某些自身免疫性疾病和一些B 系淋巴瘤的新型药物。   1.人BAFF在大肠杆菌中的SUMO 融合表达及性质鉴定此前hsBAFF 蛋白的获取基本上是通过变复性手段。而包涵体的变复性过程相当复杂和繁琐。如果能够尽量地以可溶的形式表达,那就会大大简化hsBAFF蛋白的纯化生产过程。我们利用SUMO 融合表达技术,高可溶性的在大肠杆菌中原核表达了His6-SUMO-hsBAFF,并对其进行了酶切和纯化,最终hsBAFF 蛋白得率要优于以往的变复性工艺。并且,hsBAFF 也表现出了明显刺激B 淋巴细胞增殖以及和BAFF 抗体免疫识别的作用。   2.BAFF 人源性抗体在CHO 细胞中的稳定表达及性质鉴定为了开发靶向人类自身免疫性疾病的基因工程药物,我们融合了BAFF的单链抗体片断(scFv)和人IgG1 Fc 片段,设计了BAFF的全人源性基因工程抗体——scFv-Fc,将其亚克隆至pEE14 载体并在真核系统中进行稳定表达。表达产物经过Protein A 纯化以后,不仅特异性识别人可溶性BAFF,而且还可识别细胞膜表达的BAFF,体外表现出对hsBAFF 生物学活性的抑制作用。此抗体克服了鼠源抗体的免疫源性问题,是具有潜在开发价值的、针对BAFF 引发的人类自身免疫性疾病和B 细胞淋巴瘤的临床诊断试剂和基因工程药物。
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