【摘 要】
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背景:桦褐孔菌多糖（Inonotus Obliquus Polysaccharide,IOP）是桦褐孔菌的有效成分之一,具有抗炎、降血糖、抗肿瘤、抗氧化等生物学特性。结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是肠道系统常见的一种恶性肿瘤。众所周知,炎症与癌症的发生、发展是紧密相连的,且两者之间相互促进。在炎症过程中,炎症小体起着关键性作用,其中NLRP3炎症小体的研究较为深入,但对CR
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背景:桦褐孔菌多糖（Inonotus Obliquus Polysaccharide,IOP）是桦褐孔菌的有效成分之一,具有抗炎、降血糖、抗肿瘤、抗氧化等生物学特性。结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是肠道系统常见的一种恶性肿瘤。众所周知,炎症与癌症的发生、发展是紧密相连的,且两者之间相互促进。在炎症过程中,炎症小体起着关键性作用,其中NLRP3炎症小体的研究较为深入,但对CRC的作用尚不明确。目的:旨在研究IOP对结直肠癌细胞株生物学特性的影响,明确其抗肿瘤机制是否与NLRP3炎症小体有关。方法:1.将SW620细胞分为对照组和实验组（50、100、150μg/mL IOP组）,培养48h后,CCK-8方法检测IOP对细胞生长的作用;细胞集落形成实验检测IOP对细胞集落形成的情况;伤口愈合实验检测IOP对细胞横向迁移能力的影响;Western blot实验检测细胞中凋亡相关蛋白的表达情况。2.用IOP处理SW620细胞后,实时定量PCR检测ASC、caspase-1、NLRP3、IL-1β、IL-18mRNA的表达情况;Western blot检测NLRP3炎症小体的蛋白表达情况;ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β、IL-18的含量。3.用NLRP3特异性抑制剂MCC950处理SW620细胞后,Western blot检测IOP处理SW620细胞后ASC、caspase-1、NLRP3的表达水平;ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β、IL-18的含量。4.NLRP3过表达质粒作用于SW620细胞后,Western blot检测IOP处理SW620细胞后ASC、caspase-1、NLRP3的表达情况;ELISA检测细胞上清液中IL-1β、IL-18的含量。结果:1.CCK-8结果显示,IOP以剂量依赖的方式抑制SW620细胞增殖;细胞集落形成实验表明,IOP处理可剂量依赖性地减少培养7天后形成的集落数;划痕实验表明,IOP处理可抑制SW620细胞的迁移;Western blot结果表明,IOP可以促进SW620细胞凋亡。2.实时定量PCR结果表明,与对照组比较,IOP可使ASC、caspase-1、NLRP3、IL-1β、IL-18的mRNA表达增加;Western blot结果表明,IOP显著增加NLRP3炎症小体的蛋白水平;ELISA结果显示,IOP可使IL-1β和IL-18的表达增加。3.Western blot和ELISA结果表明,与MCC950组相比,IOP+MCC950组中ASC、caspase-1、NLRP3及细胞因子IL-1β、IL-18的表达显著增加;而IOP组与IOP+MCC950组相比,ASC、caspase-1、NLRP3、IL-1β、IL-18的表达也明显升高。4.NLRP3过表达转染后,Western blot和ELISA结果表明,与对照组相比,NLRP3过表达组中ASC、caspase-1、NLRP3、IL-1β、IL-18的表达显著增加;与NLRP3过表达组相比,IOP+NLRP3过表达组中ASC、caspase-1、NLRP3、IL-1β、IL-18的表达明显增加。结论:IOP可抑制SW620细胞的生长,其机制可能与启动NLRP3炎症小体及上调相关细胞因子的表达有关。
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