苦荞抗氧化肽的结构表征及其对氧化应激状态下Caco-2细胞的影响

来源 :上海应用技术大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:itshuai
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
机体的氧化应激是许多疾病的诱因,多肽具有良好的抗氧化活性且安全性高已成为研究的热点。苦荞作为一种药食两用的杂粮,具有较高的营养价值,蛋白质含量丰富,氨基酸组成合理。本论文通过碱性蛋白酶水解苦荞球蛋白得到六条具有抗氧化活性的多肽,鉴定多肽序列并模拟其三维结构。通过苦荞多肽干预Caco-2细胞氧化应激模型,探究其对氧化应激状态下细胞的保护作用。并利用代谢组学,对其在氧化应激状态下的作用的机理进行了研究。主要实验结果如下:(1)通过葡聚糖凝胶G-75分离纯化蛋白粗提物得到苦荞球蛋白,碱性蛋白酶将其水解后,分析鉴定出六条分子量3000 Da以下的多肽,其序列分别为:CR-8(CTGFVAVR),LR-8(LRGENDQR),GK-10(GFIVQAQDLK)SR-12(SFFLAGQSQQGR),SR-17(SEAGVTEIWDHNTPEFR)和YR-26(YVIQPGGLLLPSYSNAPYITFVEQGR)。通过Py MOL模拟多肽的三维结构可知,六条多肽中均存在不规则卷曲及β-折叠,C端和N端结构存在一定差异性。六条多肽的DPPH及ABTS自由基清除能力存在显著差异。综合多肽的抗氧化能力及分子量,选择CR-8,LR-8,GK-10和SR-12这四条苦荞多肽进行细胞实验。(2)采用H2O2作为Caco-2细胞氧化应激诱导物,构建氧化损伤模型。通过研究细胞活性、细胞凋亡与坏死、细胞周期、总抗氧化能力T-AOC、丙二醛含量(MAD)以及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性分析苦荞多肽对氧化应激状态下细胞的保护作用。研究发现:H2O2会使细胞内酶活降低,并使MDA含量升高导致细胞膜的损伤,从而导致Caco-2细胞的凋亡。而苦荞多肽的干预可以显著降低Caco-2细胞的凋亡率,提高线粒体膜电位与细胞内酶活,增加细胞的总抗氧化能力并减少脂质的过氧化,保护了细胞生理活动的正常。其中苦荞多肽CR-8对氧化损伤细胞的恢复效果最好。(3)通过软件模型拟合处理并结合代谢产物数据库查找,得到苦荞多肽CR-8干预氧化应激状态下细胞标志性差异代谢产物及其影响的代谢通路,从代谢组学角度分析苦荞活性多肽对Caco-2细胞氧化应激的干预作用。由多元统计PCA,PLS-DA及OPLS-DA分析代谢产物可知,经过苦荞多肽干预后,CR-8可以改善细胞氧化应激状态。通过S-plot得分图筛选出10种具有差异性的代谢产物,包括:L-乙酰基肉碱;L-色氨酸;乙酰亚精胺;溶血磷脂酸(20:4);溶血磷脂酸(20:3);溶血磷脂酸(16:0);泛酸;甘油磷酸乙醇胺;L-组氨酸;L-丙氨酸。由Metabo Analyst分析得到CR-8可能参与了10条代谢通路,其中贡献值最高的是甘油磷脂代谢。因此,苦荞多肽CR-8可以参与细胞内的脂肪酸代谢和氨基酸代谢等相关通路来改善细胞的氧化应激状态。
其他文献
心房颤动是最常见的心律失常之一,可导致血栓栓塞和心衰等,使患者致残和致死。房颤相关的病理生理改变主要包括电重塑、结构重塑、自主神经重塑以及钙调控异常。超快速延迟整
本文选用性质稳定的TiO2作为催化剂载体,利用原位生长法调控生长高分散性高价态的锰氧化物作为活性组分,负载在球状载体TiO2上,通过浸渍煅烧硝酸铈前驱体,制备Ce(1.0)Mn/TiO2-S
近年来,化石能源的过度使用和由此带来的环境问题日趋严重。太阳能驱动的光电化学(PEC)分解水被广泛认为是最具潜力的解决途径之一。PEC分解水包括光阳极上的析氧反应(OER)和
磁性液体是近代出现的一种新型的功能材料,密封是其最成功的应用。与传统密封如机械密封、迷宫密封相比,磁性液体密封具有寿命长、无泄漏、低黏性摩擦等优点得到各行各业广泛
随着经济社会的快速发展与现代型诉讼的日益增加,基于公正与效率的需求,世界各国都面临着完善事证收集程序,增加当事人的证据搜集方式,并使不承担证明责任的一方提供一定协力
随着经济的发展,环境污染问题越来越严重。废水中的染料和空气中的VOCs给生态环境和人类健康带来了极大的危害。光催化技术是解决环境污染问题,修复生态环境的有效技术之一。
自我国加入世贸以来,国际经济往来日益增多。国际商事仲裁作为诉讼的替代纠纷解决方式,凭借其自主性、便捷性、兼容性和经济性等特点被广泛择用。但随着法院拒绝承认和执行仲裁裁决的理由当中,超裁一词频繁出现,该问题逐渐引起学者们的关注。超裁作为不予承认和执行仲裁裁决的事由之一,大多数国家对其适用持肯定态度。但由于超裁标准的抽象性和模糊性,使得超裁在实际适用中具有一定的不确定性。实践中因为缺乏具体的超裁标准,
伴随着水平井和大位移井技术的发展,水平井段和大位移井段的砂沉积卡堵问题成为一个关注的焦点,清砂作业成为了研究热点。本文研究将石墨烯作为油基和水基清砂液添加剂,分别
本论文是一篇英译中翻译实践报告。翻译项目的源文本选自英国新闻记者弗雷德里克·阿瑟·麦肯齐(Frederick Arthur McKenzie,1869-1931)于1920年出版的历史文本《韩国:为自由而战》(Korea’s Fight for Freedom),原文尚无中文译本出版。笔者翻译的是本书的第五章和第六章。这部分内容主要描述了日本在韩国的统治及韩国人民对日本侵略的反抗。本次翻译实践有助
近年来,二维范德华晶体中长程铁磁有序的实现使得自旋电子学得到了进一步发展,但是,石墨烯固有磁性的缺乏限制了其在该方面的应用。在石墨烯中,诱导出强的长程铁磁性仍然是一