本论文分为五章:第一章为文献综述,第二章为基于抗心肌缺血药物体系的补心汤有效物质提取工艺研究,第三章为基于抗心肌缺血药物体系的补心汤有效物质富集工艺研究,第四章为基于抗心肌缺血药物体系的补心汤有效物质质量控制方法研究,第五章为总结与讨论。第一章 文献综述对中药抗心肌缺血作用机制的研究进展以及补心汤各单味药材人参、茯苓、远志、蒲黄化学成分和药理作用以及补心汤全方的研究进展进行了综述,共引用文献85篇。第二章 基于抗心肌缺血药物体系的补心汤有效物质提取工艺研究基于药物体系三大特性自然性、协同性、亲和性表征,利用课题组PK-PD-DI方法技术,发现与确定本方抗心肌缺血药物体系组成为:酚类和萜类两大类,其中酚类又包括黄酮类和寡糖酯类两小类,萜类包括三萜皂苷类。其中酚类中的寡糖酯类成分为主要贡献成分,萜类中的三萜皂苷类为主要贡献成分。并筛选出了各小类的指标性成分,分别是黄酮类对应香蒲新苷,寡糖酯类对应3,6’-二芥子酰基蔗糖,三萜皂苷类对应人参皂苷Rb1。对基于抗心肌缺血药物体系的补心汤有效物质提取工艺进行研究,采用正交试验设计,以萜类和酚类及其指标性成分的提取量为考察指标,对提取溶剂(A)、溶剂倍量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)4个因素进行考察。以萜类提取量为指标进行分析,除因素B外,其余因素A、C、D均有显著性差异。以萜类提取量为指标,最佳工艺为AaBbCcDd。以酚类及其指标性成分提取量为指标进行分析,只有因素D有显著性差异,其余因素无显著性差异,因此,以酚类及其指标性成分提取量为指标进行分析,补心汤提取最佳工艺为AaBbCcDd。综合考虑正交试验结果并结合实际生产和药物经济学,确定的最佳提取工艺为AaBbCcDd,即a乙醇回流提取d次,每次c小时,溶剂用量为b倍量。对提取工艺进行三批验证,结果表明该补心汤有效物质提取工艺稳定、可行。萜类和酚类均可以被较完全的提取(萜类平均提取率为83.81%,酚类平均提取率为95.11%)。第三章 基于抗心肌缺血药物体系的补心汤有效物质富集工艺研究对基于抗心肌缺血药物体系的补心汤有效物质富集工艺进行了研究。以酚类的吸附量和转移率为考察指标,对树脂类型进行筛选,通过测定分析6种不同类型大孔吸附树脂对酚类的吸附特性,得出D型大孔吸附树脂对酚类的吸附以及解吸附能力较强,解吸附后的洗脱物中酚类的含量较高。最终选择D型大孔吸附树脂作为基于抗心肌缺血药物体系的补心汤有效物质的树脂。进而以萜类和酚类及其指标性成分的含量及转移率为主要考察指标对D型大孔吸附树脂富集工艺进行研究,分别对其吸附条件、除杂条件、洗脱条件进行优化,包括上样液浓度、上样量与树脂体积比、树脂柱径高比、吸附流速、最大上样量;水洗倍量、水洗流速;洗脱溶剂、洗脱流速、洗脱倍量等参数的考察,确定的最佳树脂富集工艺为:补心汤提取物用水分散,制成浓度为N2(以生药量计)的上样液,通过D型大孔吸附树脂进行吸附,上样量与树脂体积比为T4,树脂柱径高比为G2,吸附流速为FV1;吸附完毕后,用SB2倍树脂体积水洗脱除杂,水洗流速为SV2;水洗除杂完毕后,用X5乙醇洗脱FT4倍树脂体积,洗脱流速为XV2,收集X5乙醇洗脱液,减压回收溶剂,真空干燥,即得补心汤酚类制备物;继用TX3乙醇洗脱TT3倍树脂体积,洗脱流速为XV2,收集TX3乙醇洗脱液,减压回收溶剂,真空干燥,即得补心汤萜类制备物。其中酚类制备物中酚类指标性成分已经洗脱完全,且不含有萜类指标性成分人参皂普Rb1;萜类制备物中含有少量酚类物质,但萜类指标性成分已完全洗脱。对补心汤酚类有效物质及萜类有效物质制备工艺进行了验证。3批样品的制备和含量测定结果为:补心汤酚类有效物质平均得率为2.76%,萜类有效物质平均得率为2.12%;补心汤酚类有效物质中酚类平均含量为43.00%,3,6’-二芥子酰基蔗糖平均含量为3.28%,香蒲新苷平均含量为0.90%;萜类有效物质中萜类平均含量为73.31%,人参皂苷Rb1平均含量为2.57%;补心汤有效物质中总酚转移率平均值为73.80%,总萜转移率平均值为66.84%,其中3,6’-二芥子酰基蔗糖转移率平均值为83.63%,香蒲新苷转移率平均值为62.37%,人参皂苷Rb1移率平均值为58.78%,表明补心汤酚类有效物质及萜类有效物质提取富集工艺合理、稳定。对补心汤水提物、醇提物、富集物进行了药效比较研究。采用大鼠舌下静脉注射脑垂体后叶素造成急性心肌缺血模型,选择血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)作为衡量心肌缺血性损伤的生化指标,通过对数据分析得出,模型对照组大鼠CK、LDH明显高于正常对照组,说明舌下静脉注射脑垂体后叶素造成急性心肌缺血模型成功。补心汤水提物组、醇提物组和富集物组大鼠CK、LDH含量明显低于模型对照组(P<0.01),说明补心汤各提取物对模型大鼠心肌损伤均有治疗作用;补心汤醇提物和富集物组大鼠CK、LDH含量明显低于水提物组(P<0.01),说明醇提物和富集物组药效明显高于水提物组;补心汤醇提物组和富集物组大鼠CK、LDH含量无显著性差异,可以得出二者在治疗心肌缺血上药效相当,由于补心汤各制备物给药量均是3g/kg(按生药量计算),根据出膏率的不同,补心汤醇提物组每天需要灌服0.113g/只,而富集物组每天只需灌服0.0244g/只,可以看出补心汤富集物组只用更少的量就能够达到最佳的药效。第四章基于抗心肌缺血药物体系的补心汤有效物质质量控制方法研究建立了可见分光光度法测定基于抗心肌缺血药物体系的补心汤提取物,补心汤酚类有效物质中总酚的含量测定方法,并对三氯化铁-铁氰化钾显色反应进行了方法学考察。以3,6’-二芥子酰基蔗糖为对照品计算回归方程为y=79.049x+0.116 r=0.99955(n=6),表明 3,6’-二芥子酰基蔗糖在0.00172mg/mL～0.01032 mg/mL的浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。3,6’-二芥子酰基蔗糖平均加样回收率为102.74%,RSD=1.31%(n=6)。补心汤酚类有效物质中酚类平均含量为43.00%,该方法准确、可靠、稳定性好,可作为补心汤酚类有效物质及萜类有效物质中酚类质量控制的有效方法。建立了高效液相色谱法测定基于抗心肌缺血药物体系的补心汤提取物,补心汤酚类有效物质中指标性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖和香蒲新苷的HPLC定量方法,其中3,6’-二芥子酰基蔗糖的回归方程为:y=2251992x-15518 r=1.0000(n=6);香蒲新苷的回归方程为:y=2007015x-6000.9 r=0.9999(n=7)实验结果表明3,6’-二芥子酰基蔗糖在0.1236μg～0.7416μg,香蒲新苷在0.06867μg～0.48069μg质量范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。补心汤酚类有效物质中3,6’-二芥子酰基蔗糖平均含量为3.28%,香蒲新苷平均含量为0.90%,该方法准确、简便、稳定,可作为补心汤提取物和酚类有效物质3,6’-二芥子酰基蔗糖和香蒲新苷的含量测定方法。建立了可见分光光度法测定基于抗心肌缺血药物体系的补心汤提取物、补心汤萜类有效物质中萜类的含量测定方法,并对香草醛-高氯酸显色反应进行了方法学考察。以人参皂苷Rb1对照品计算回归方程y=18.125x-0.0074 r=0.999(n=7),表明人参皂苷Rb1在0.008mg/mL～0.056mg/mL的浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。人参皂苷Rb1平均加样回收率为99.84%,RSD=1.67%(n=6)。补心汤萜类有效物质中萜类平均含量为73.30%,该方法准确、可靠、稳定性好,可作为补心汤酚类有效物质及萜类有效物质中萜类质量控制的有效方法。建立了高效液相色谱法测定基于抗心肌缺血药物体系的补心汤提取物,补心汤萜类有效物质中指标性成分人参皂苷Rb1的HPLC定量方法,其中人参皂苷Rb1的回归方程为:y=173330x-12289 r=0.996(n=6)。实验结果表明人参皂苷Rb1在1.24μg～7.44μg质量范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。补心汤萜类有效物质中人参皂苷Rb1的平均含量为2.57%,该方法准确、简便、稳定,可作为补心汤提取物和萜类有效物质人参皂苷Rb1的含量测定方法。第五章 总结与讨论1建立了基于抗心肌缺血药物体系的补心汤有效物质的提取工艺。2建立了基于抗心肌缺血药物体系的补心汤酚类有效物质和萜类有效物质的富集工艺,并对补心汤水提物、醇提物、富集物进行了药效比较研究,结果发现补心汤富集物具有非常好的药效。3建立了基于抗心肌缺血药物体系的补心汤酚类有效物质和萜类有效物质的质量控制方法。