【摘 要】
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牛O型口蹄疫(FMD)是一种由牛O型口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性传染性疾病,传播速度快,易引起爆发流行。为了研制牛O型FMD重组蛋白疫苗,我们根据牛O型FMDV VP1的B细胞表位和T细
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牛O型口蹄疫(FMD)是一种由牛O型口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性传染性疾病,传播速度快,易引起爆发流行。为了研制牛O型FMD重组蛋白疫苗,我们根据牛O型FMDV VP1的B细胞表位和T细胞表位结构特征,以不同连接方式设计了多种表位多肽,利用分子生物学软件对其空间结构进行了预测分析,其中FMD-J11的结构类似于病毒VP1,即球形蛋白表面有一个呈环状结构的B细胞表位。然后,采用PCR法和克隆-亚克隆法人工合成了FMD-J11的编码基因,将其克隆入原核表达载体pET28a,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达了FMD-J11。其次,筛选了高产、稳定地表达FMD-J11蛋白的工程菌种,并进行了中式规模的发酵培养,建立了适合该菌株培养的发酵条件。利用镍亲和层析及变复性方法获得了纯度大于98%的FMD-J11蛋白,并在FMD-J11免疫的豚鼠血清中检测到1:156效价的病毒中和抗体。为了解决FMD-J11纯化中易形成多聚体问题,以点突变方法对其结构进行了优化改造,获得了具有更强抗原性的突变体(FMD-J11-A)。本研究有望将FMD-J11-A开发为牛O型口蹄疫的重组蛋白疫苗,为基因工程疫苗的设计提供了新思路。
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