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目的:研究饱和氢气生理盐水对大鼠原位肝移植术后急性肾损伤的保护作用,并进一步探讨自噬参与其肾脏保护效应的分子机制。方法:健康成年雄性SD大鼠56只,周龄8~10周,体重220~250 g,采取随机数字表法随机分为4组(n=8):假手术组、大鼠原位肝移植模型组(OLT组)、饱和氢气生理盐水处理组(HS组)及氯喹预处理组(CQ组),其中假手术组8只,其它三组均为8对。假手术组行单纯开关腹操作,并游离相应血管和肝周韧带;大鼠原位肝移植模型组建立大鼠原位肝移植模型,并于无肝期前5 min经下腔静脉缓慢注射生理盐水6 ml/kg;饱和氢气生理盐水处理组于无肝期前5 min经下腔静脉缓慢注射饱和氢气生理盐水6 ml/kg,其它操作同大鼠原位肝移植模型组;氯喹预处理组于模型建立前1 h经腹腔注射自噬特异性抑制剂氯喹60mg/kg,其它处理同饱和氢气生理盐水处理组。再灌注后6 h抽取静脉血样和肾组织检测血清学和组织学指标,通过检测血清尿素氮(BUN)及肌酐(Cr)水平评价肾功能情况,测定肾组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性评价肾脏氧化应激程度,通过伊红-美蓝(HE)染色于光学显微镜下观察肾组织形态学改变,并行肾小管损伤评分;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色法定量检测肾小管上皮细胞凋亡情况,计算凋亡指数;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测活化的caspase-3、细胞色素c(Cyt c)等凋亡相关m RNA的表达水平;通过蛋白免疫印迹法(western blot)检测磷酸化p53(p-53)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin-1、活化的caspase-3和细胞色素c(Cyt c)等自噬及凋亡相关蛋白的表达水平;并且通过透射电子显微镜观察自噬小体和自噬溶酶体的形成情况以及肾小管上皮细胞超微结构改变。结果:与假手术组比较,OLT组肾功能显著降低,肾小管上皮细胞出现空泡及管型,肾小管损伤评分增加,肾脏氧化应激水平升高,细胞凋亡明显增加,凋亡指数升高,活化的caspase-3和Cyt c的表达水平显著上调,p53磷酸化、LC3Ⅱ及Beclin-1的表达水平差异无统计学意义;与OLT组比较,HS组大鼠肾功能明显改善,肾组织空泡样改变减少,肾小管损伤评分降低,肾脏氧化应激损伤减轻,细胞凋亡明显减少,凋亡指数降低,并且活化的caspase-3和Cyt c的表达水平显著降低,与此同时,p53磷酸化、LC3Ⅱ及Beclin-1的表达明显上调,透射电镜下可见自噬小体和自噬溶酶体的形成增加;与HS组比较,CQ组大鼠肾功能降低,肾组织病理学损伤严重,肾小管损伤评分和凋亡指数升高,肾脏氧化应激水平升高,细胞凋亡增加,活化的caspase-3和Cyt c的表达水平上调,LC3Ⅱ及Beclin-1的表达下调,p53磷酸化的表达水平差异无统计学意义,应用氯喹抑制自噬后部分抵消了饱和氢气生理盐水的肾脏保护效应。结论:饱和氢气生理盐水可通过调控p53磷酸化的表达,诱导细胞自噬的激活,并且自噬激活通过抑制肾小管上皮细胞凋亡、减轻肾脏氧化应激损伤等途径缓解大鼠原位肝移植术后急性肾损伤。