黄芪对急性肾衰竭大鼠TLR4、TNF-α、Caspase-3表达的影响

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目的:观察GM致急性肾衰竭大鼠肾组织TLR4、Caspase-3,血清TNF-α的表达及中药黄芪的干预作用,为临床急性肾衰竭早期中药的保护作用提供一定的理论支持。方法:36只健康SD大鼠,随机分为正常组、ARF组、黄芪干预组,每组12只,ARF组通过腹腔注射庆大霉素,50mg/kg·d,并给予等量生理盐水,连续注射7天,构建GM致急性肾衰竭大鼠模型。黄芪干预组:腹腔注射庆大霉素,50mg/kg·d,30min后预防性腹腔注射黄芪注射液,20ml/kg·d,连续注射7天。正常组大鼠予等量的生理盐水。实验第8天,所有大鼠静脉取血,全自动生化分析仪检测SCr、BUN的浓度,检测肾功能,ELISA法检测血清中TNF-α的表达水平,处死实验动物,取出肾组织,进行HE染色,光镜下观察病理变化,流式细胞仪检测肾小管上皮组织TLR4表达,免疫组化检测肾组织 Caspase-3蛋白的表达。所有获得的实验数据,以均数±标准差()表示,使用 SPSS17.0统计软件进行数据分析,应用方差分析方法进行数据统计。  结果:(1)各组大鼠肾功能检测:①各组大鼠血肌酐浓度:正常组59.96±10.22, ARF组575.80±30.43,黄芪干预组150.16±15.22。ARF组及黄芪干预组结果显示血肌酐较基础值上升大于50%,可视为造模成功,正常组血肌酐在正常范围内。ARF组及黄芪干预组大鼠血肌酐浓度均显著高于正常组,黄芪干预组浓度低于ARF组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。②各组大鼠血尿素氮浓度:正常组8.34±1.00,ARF组34.10±5.93,黄芪干预组10.43±5.09。ARF组及黄芪干预组大鼠血尿素氮浓度均显著高于正常组,黄芪干预组浓度低于ARF组,差异具有统计学意义(P<0.05)。  (2)各组大鼠肾组织病理变化:光镜下观察正常组大鼠肾组织未见病理改变。ARF组结果显示光镜下肾小管上皮细胞扁平,细胞膜破裂,细胞内容物溢出,大量炎性细胞浸润,符合ARF病理改变。黄芪干预组显示较ARF组好转。  (3)各组大鼠血TNF-α浓度:正常组199.00±9.87,ARF组552.92±34.64,黄芪干预组441.106±30.63。ARF组及黄芪干预组大鼠血清TNF-α浓度均显著高于正常组,黄芪干预组浓度低于ARF组,差异具有统计学意义(P<0.05)。  (4)各组大鼠肾组织Caspase-3蛋白表达:正常组0.0309±0.0073,ARF组0.0915±0.0190,黄芪干预组0.0462±0.0142。免疫组化结果示ARF组及黄芪干预组肾组织Caspase-3与正常组相比,阳性细胞的数量明显增多,肾小管上皮细胞黄染数量及程度较强,蛋白表达增高,差异具有统计学意(P<0.05),黄芪干预组与ARF组相比阳性细胞数量减少,黄染数量及程度低,蛋白表达降低,且对比差异有统计学意义(P<0.05)。  (5)各组大鼠肾组织TLR4荧光强度:正常组20.01±3.51,ARF组37.01±1.71,黄芪干预组22.43±3.72。ARF组及黄芪干预组肾组织TLR4荧光强度明显高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05),黄芪干预组低于ARF组,差异具有统计学意义(P<0.05)。  结论:1.TLR4、TNF-α、Caspase-3在 GM致急性肾衰竭大鼠的表达明显升高,说明它们在GM致急性肾衰竭的产生机制中起重要作用。  2.黄芪可改善GM致急性肾衰竭大鼠肾功能的恶化及病理损伤,其保护作用可能与降低TLR4、TNF-α、Caspase-3的表达有关。
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