【摘 要】
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目的:适配体是一种长度为20-100碱基的单链核酸(DNA或RNA),对其目标物具有高特异性和亲和性。止咳平喘中成药在我国市场中占有份额较大,一些不法商家为牟取利益在其中非法添加微量沙丁胺醇,严重损害消费者利益,因此快速检测微量沙丁胺醇的非法添加在生产和销售过程中具有重要意义。本研究以核酸适配体技术为基础,构建了两种基于竞争效应的新型适配体传感器。方法:1.以沙丁胺醇适配体为检测元件,用辣根过氧化
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目的:适配体是一种长度为20-100碱基的单链核酸(DNA或RNA),对其目标物具有高特异性和亲和性。止咳平喘中成药在我国市场中占有份额较大,一些不法商家为牟取利益在其中非法添加微量沙丁胺醇,严重损害消费者利益,因此快速检测微量沙丁胺醇的非法添加在生产和销售过程中具有重要意义。本研究以核酸适配体技术为基础,构建了两种基于竞争效应的新型适配体传感器。方法:1.以沙丁胺醇适配体为检测元件,用辣根过氧化物酶和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的显色反应作为输出信号,在适配体对靶标的捕获反应结束后,经过磁性微球的分离作用得到检测上清液,并对上清液进行显色反应,目测判断检测结果,构建了一种新型可视化适配体传感器用于沙丁胺醇的快速检测。2.以沙丁胺醇适配体作为识别元件,量子点作为输出信号,在适配体对靶标的捕获反应结束后,经过磁性微球的分离作用得到检测上清液,最终借助荧光分光光度计测定上清液荧光值进行结果判定,构建了一种快速检测非法添加沙丁胺醇的新型荧光适配体传感器。结果:1.所构建的可视化适配体传感器在优化实验条件下,检测结果随着沙丁胺醇浓度升高显色反应颜色逐渐加深,且沙丁胺醇浓度与显色反应的紫外吸光度在0.1~10μmol/L之间呈良好线性关系(r2=0.9959),检出限为0.1 μmol/L。对止咳平喘中成药实际样品进行沙丁胺醇加标回收实验,回收率为86.0%~106.0%,相对标准偏差为3.9%~11.6%。2.所构建的荧光适配体传感器在优化实验条件下,检测结果荧光值随着沙丁胺醇浓度升高逐渐增大,检出限为0.1 μmol/L。对止咳平喘中成药样品进行沙丁胺醇加标实验,结果荧光强度随着沙丁胺醇浓度增加而增强。结论:1.所建立的可视化适配体传感器操作简便,特异性优异,稳定性高,检测结果目测可得,在非法添加沙丁胺醇的中成药实际样品的现场快速检测具有良好的应用前景。2.初步建立的荧光适配体传感器制备方法简单,成本较低,特异性良好,能够实现对非法添加沙丁胺醇的定性检测以及半定量,可以用于非法添加沙丁胺醇实际检测。3.本论文基于核酸适配体技术开发了两种止咳平喘中成药中非法添加沙丁胺醇的快速检测方法,探索了适配体技术在快速检测领域的进一步发展,一定程度上实现了核酸适配体的应用创新。
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