【目的】1.建立结肠癌的动物模型，了解裸鼠结肠癌皮下移植瘤的病理改变。2.通过对大鼠骨髓源性间充质干细胞的分离、培养、纯化、标记及鉴定，为MSCs进行裸鼠结肠癌模型干预提供实验基础。3.通过输注骨髓间充质干细胞观察裸鼠结肠癌组织中是否有间充质干细胞，明确间充质干细胞对结肠癌组织的靶向作用及对结肠癌组织生长的影响作用。【方法】1.采用裸鼠皮下注射结肠癌细胞株Hct116方法建立裸鼠结肠癌皮下移植瘤模型：将对数生长期的Hct116细胞,用0.25%的胰酶消化,PBS液吹打,1000转/分室温下离心，10min,弃上清,重复上述步骤3次后,用无血清培养液重悬细胞制成单细胞悬液,调整细胞浓度至107/ml。细胞悬液摇匀后,用1ml无菌注射器吸取细胞悬液0.2ml(含2×106细胞)备用。消毒裸鼠右侧腰部皮肤，将注射器内细胞注射于右侧腰部皮下。共注射20只。注射完毕后，连续观察10天，待裸鼠右侧腰部长出直径大于5mm的的皮下瘤，裸鼠结肠癌模型建立。将20只裸鼠裸鼠结肠癌模型按随机数字表法分为2组，实验组10只，对照组10只。2.采用全骨髓差异贴壁法培养骨髓间充质干细胞（MSCs）：将大鼠断颈处死，在75%的酒精溶液中浸泡5min后于无菌环境下迅速取出双侧下肢,浸入含有双抗的PBS液中,洗涤并去除肌肉及附着软组织,固定分离出的下肢长骨，剪刀减去两端，用DMEM培养液2.5ml冲洗长骨骨髓腔，冲洗2-3次。将冲洗下来的含间充质干细胞的悬液于1000rpm下离心5min，倒掉上清液，用含有10%胎牛血清的DMEM培养液重悬，接种于75cm2细胞培养瓶内，并放于温度37℃，5%CO2的培养箱中进行培养。每天显微镜下观察间充质干细胞的生长情况。原代培养的间充质干细胞长满培养瓶面积约80%-90%时1:2或1:3进行传代培养。传代培养至第3代时，胰酶消化贴壁细胞，并收集细胞，流式细胞仪上机检测。3.将获取的MSCs进行传代、增殖及纯化。第3代MSCs用一种羰花青荧光染料CM-DiI(Chlormethylbenzamido-1，1dioctadecyl-3，3，3ˊ，3ˊ-tetramethylindocarbocyamine)进行标记，在荧光显微镜下观察并计算标记率。再将标记的MSCs制成细胞悬液，浓度为1×106/ml，于Hct116细胞注射至裸鼠皮下第10天，将裸鼠结肠癌模型实验组每只裸鼠尾静脉注射2ml含1×106个标记的MSCs细胞悬液，对照组每只裸鼠尾静脉注射2ml生理盐水。观察移植瘤生长情况，每3-4天同时测量两组移植瘤瘤长、短径，计算瘤体积，描绘肿瘤生长曲线，于移植MSCs14天，安乐死裸鼠，取皮下移植瘤，称瘤重，计算抑瘤率。将取下的肿瘤组织行快速冰冻病理切片，通过荧光显微镜观察肿瘤组织切片中是否含发荧光的阳性细胞；其余肿瘤组织行HE染色普通病理切片检查，显微镜下观察肿瘤组织的病理学变化。【结果】1.裸鼠皮下注射结肠癌细胞株Hct116后，于注射后第10天，裸鼠皮下均长出直径大于5mm的的皮下瘤。将结肠癌皮下移植瘤组织行病理切片HE染色可观察到，移植瘤细胞为腺癌，癌细胞核大小不一，数量不等，存在多核瘤巨细胞，可见病理核分裂像，多弥漫呈片状或巢状，细胞内充满黏液样分泌物。2.原代接种24h后在显微镜观察可见较多细胞贴壁，外观呈纺锤形和多角形，3天之后细胞的数量开始增多，且形态发生变化呈成纤维细胞样长梭形，9天之后细胞长满培养瓶面积90％左右，此时细胞呈极性排列，集落呈漩涡状。经过多次换液以及2次传代后，至第3代时，细胞趋于纯化，形态均一，呈膜状铺展。细胞表面标记物经流式细胞仪检测，CD29阳性率为98.6%、CD90阳性率99.6%；而CD34、CD45为阴性，阳性率分别为0.56％、0.89%。3.验组皮下移植瘤组织体积与对照组皮下移植瘤组织体积之间的差异无统计学意义(P>0.05)；实验组瘤重与对照组瘤重之间的差异无统计学意义(P>0.05)。实验组皮下瘤冰冻病理切片组织于荧光显微镜下观察可见发红色荧光CM-DiI阳性细胞。【结论】1.采用裸鼠皮下注射结肠癌细胞株Hct116，可成功制备裸鼠结肠癌模型，此实验方法稳定，重复性好。2.全骨髓差异贴壁法能够获得较高纯度的MSCs，为后续实验提供了充足的MSCs来源。3. MSCs具有靶向结肠癌组织的作用。4. MSCs对结肠癌组织生长无显著影响。