紫草素诱导人涎腺腺样囊性癌细胞凋亡及机制的探讨

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目的研究紫草素体外对人涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)的抑制增殖和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制,旨在为临床应用紫草素作为治疗涎腺腺样囊性癌的一种辅助抗癌药物提供实验依据和理论依据。方法1.不同浓度紫草素处理人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞24h、48h、72h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测紫草素对SACC-83细胞的增殖抑制作用。2.30μmol/L紫草素处理人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞24h后,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。3.不同浓度紫草素处理人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞24h后,流式细胞术PI单染检测细胞周期。4.不同浓度的紫草素作用于人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞24h后,Western-Blot法检测凋亡相关蛋白caspase-9、caspase-8和caspase-3的表达。结果1.四甲基偶氮唑蓝MTT比色法结果表明:紫草素对人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞具有增殖抑制作用,其作用呈时间、剂量依赖性(P﹤0.05)。2. AO/EB荧光染色结果显示:30μmol/L紫草素处理人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞24h后荧光显微镜下观察,对照组正常活细胞呈均匀绿色,结构正常;实验组人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞,呈橘红色,固缩,圆珠状,表现出典型的凋亡细胞形态。3.流式细胞术PI单染检测结果显示:经不同浓度的紫草素作用24h后,SACC-83细胞凋亡率随药物浓度增加而逐渐升高,G0/G1期细胞的比例逐渐下降,S期细胞比例逐渐增加,G2期细胞无明显变化。4. Western-Blot结果显示:紫草素作用于人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞24h后,凋亡相关蛋白caspase-9、caspase-8和caspase-3表达均增强,与对照组相比较均有显著差异(P﹤0.05)。结论1.紫草素在体外对人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。2.紫草素诱导人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞凋亡的作用机制可能与细胞周期发生S期阻滞有关。3.紫草素诱导人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞凋亡作用机制可通过上调凋亡相关蛋白caspase-9、caspase-8和caspase-3表达,经由细胞凋亡的死亡受体通路和线粒体通路完成凋亡的启动和执行。
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