花椒药材质量标准研究

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花椒为两基原品种,来源于芸香科植物青椒 Zanthoxylum schinifolium Sieb. et Zucc.或花椒Zanthoxylum bungeanum Maxim.的干燥成熟果皮,具温中止痛,杀虫止痒的功效。经作者系统查阅中国药典,自《中国药典》1977年版一部首次收录花椒药材起,以后历版药典均收录,且将花椒和青椒共同作为花椒药材来源。前期研究表明花椒和青椒在化学成分、遗传多样性、主要药效等方面均存在明显差异,但药典现行标准并未将花椒和青椒这两个基原加以区分。  本文对花椒的药用沿革和药材样品来源进行了考证与调查;对其薄层鉴别和挥发油成分进行了研究,并在此基础上修订提高了质量标准。所起草的质量标准草案已通过四川省食品药品检验检测院复核,现已上报国家药典委员会作为2015版中国药典花椒药材标准。本文对药典收载品种花椒、青椒与地方品种竹叶花椒的挥发油成分进行了系统研究,并建立了花椒、青椒的特征图谱。研究内容如下:  1.本草考证  花椒别名红椒、大红袍,始载于《诗经》。《神农本草经》记载花椒有“温中,逐寒湿痹痛”的功效,此为花椒药用之最早记载,且其根据花椒的产地不同将花椒分为“秦椒”和“蜀椒”,此后的本草亦然。据考证,历代本草所载之“秦椒”和“蜀椒”均应为今之芸香科植物花椒 Z. bungeanum Maxim.。至唐宋时期,花椒的种植范围已逐步扩大,在“秦地”和“蜀地”的周边地区亦多有种植,且秦地亦有蜀椒种。此时区分“秦椒”和“蜀椒”已不能仅仅根据其产地的不同,而要从果实的大小、形态和种子的颜色等方面区分。可见,由于长期的分布区域不同和生存环境差异,“秦椒”和“蜀椒”在其外观形状方面已形成明显差异。《中国药典》1977年版一部首次收录花椒药材,并将花椒和青椒同作花椒药材来源。  2.药材样品收集及来源调查  本次研究收集了15批花椒样品和16批青椒样品。经鉴定,15批花椒样品均为芸香科植物花椒 Z. bungeanum Maxim.的干燥成熟果皮;16批青椒样品中,5批为芸香科植物青椒 Z. schinifoliun Sieb. et Zucc.的干燥成熟果皮,11批为芸香科植物竹叶花椒Zanthoxylum armatum DC.的干燥成熟果皮。  由市场调查和鉴定结果发现,花椒品种明确,在全国范围内广泛使用,为主流的花椒药材来源;青椒和竹叶花椒存在同名异物现象,市售的青椒大多为竹叶花椒 Z. armatum DC.的干燥成熟果皮。由于产地和使用范围大幅萎缩,青椒已不是花椒药材的主要来源,且竹叶花椒在市场大量流通。竹叶花椒作为花椒药材来源收录于《湖南省中药材标准》1993年版中。因此,本文对药典收载品种与地方品种竹叶花椒的挥发油成分进行了比较研究,为更好的利用竹叶花椒资源奠定基础。  3.薄层鉴别  由于花椒和青椒的薄层色谱行为差异较大,仅以花椒对照药材作为对照存在局限。本研究对花椒药材的薄层色谱鉴别进行了研究,增设了青椒 Z. schinifolium Sieb. et Zucc.对照药材,制定了青椒对照药材标准,并分别优化了青椒、花椒的薄层色谱鉴别方法。结果显示,该方法操作简单方便,重现性和专属性强,能有效鉴别花椒、青椒及地方品种竹叶花椒。  4.挥发油成分研究  4.1挥发油含量测定  挥发油是花椒的主要活性成分,也是《中国药典》2010年版(一部)花椒药材质量控制的含量测定指标。对不同产地的花椒、青椒和竹叶花椒进行挥发油含量的测定,结果花椒挥发油平均含量为2.07%,青椒挥发油平均含量为1.41%,竹叶花椒挥发油平均含量为5.36%。花椒和青椒的挥发油含量具有一定差异,故分别制定了花椒和青椒的挥发油含量标准,规定青椒含挥发油不得少于1.1%(ml/g);花椒含挥发油不得少于1.5%(ml/g)。竹叶花椒挥发油含量明显高于花椒和青椒,表明竹叶花椒作花椒药用具有一定科学性。  4.2挥发油组成成分分析  对不同产地的花椒、青椒和竹叶花椒挥发油组成成分进行分析。采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,用气相色谱-质谱联用法对其化学成分进行检测,以AMDIS(自动质谱退卷积定性系统)结合保留指数对其化学成分进行分析鉴定。分析鉴定结果为:15批花椒挥发油共分析鉴定成分83个;5批青椒挥发油共分析鉴定成分45个;11批竹叶花椒挥发油共分析鉴定成分49个。花椒挥发油主要含有柠檬烯、芳樟醇、乙酸芳樟酯、β-月桂烯、γ-松油烯、(-)-4-萜品醇和α-松油醇等;青椒挥发油主要含有爱草脑、芳樟醇、柠檬烯、大根香叶烯 D和石竹烯等;竹叶花椒挥发油主要含有芳樟醇、柠檬烯、(-)-4-萜品醇、乙酸芳樟酯、α-松油醇和大根香叶烯 D等。花椒挥发油中相对含量最高的为柠檬烯和芳樟醇;青椒挥发油中相对含量最高的为爱草脑;竹叶花椒挥发油中相对含量最高的为芳樟醇。结果表明,花椒、青椒和竹叶花椒三者的挥发油组成成分差异较大。  4.3特征图谱研究  中药特征图谱以整体观念和模糊理念为原则,对中药的真伪鉴定及质量评价具有重要意义。本研究以正己烷为溶剂,采用超声提取的方法,以气相色谱-质谱联用法分别对花椒和青椒的特征图谱进行研究。该方法操作简便,提取时间短,提取温度低,能有效避免水蒸气蒸馏法提取挥发油成分过程中的提取时间长、提取温度高导致热敏物质变性等问题。分别建立了花椒和青椒的特征图谱。本论文所建立的特征图谱可明显区别花椒、青椒及地方品种竹叶花椒,对花椒药材的鉴别和质量控制具有参考价值。  5.其他成分分析  本研究试图建立花椒和青椒的酰胺类、生物碱、香豆素类等成分的含量测定标准。但由于酰胺类成分不稳定,花椒和青椒中生物碱种类不一、且含量极低,此外,仅青椒含有香豆素类成分香柑内酯,故均未能成功建立含量测定标准。
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