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目的:食管癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一,严重影响着人们的生活健康。我国是食管癌高发区,放疗是食管癌主要治疗手段之一,放射抗性的产生是制约放疗疗效的重要原因。因此探讨食管癌细胞放射抗性,将为提高食管癌局部控制率,改善预后提供线索和依据。我们前期研究发现NRAGE在放射抗性细胞株TE13R120中表达量明显高于亲本TE13细胞,提示该基因可能参与了放射抗性的形成。因此拟通过我们的实验确定NRAGE与食管癌放射抗性的作用关系,并从细胞生物学角度探索其可能的作用机制。方法:1 MTT实验比较TE13与TE13R120细胞在不同剂量射线照射后的生长速度及放射抗性变化。2 Lipofectamine RNAi Max转染si RNA-NRAGE,敲低TE13R120细胞中NRAGE表达(简称si-NRG),阴性si RNA作对照(简称NC)。3 Western Blot及Realtime PCR技术验证NRAGE在食管癌细胞TE13、TE13R120、NC、si-NRG细胞中表达量的差异,验证si-NRG的敲低效率。4使用平板克隆形成实验比较NRAGE敲低前后TE13R120细胞的放射抗性。5流式细胞术检测TE13与TE13R120、NC与si-NRG细胞周期的分布情况。6免疫荧光检验NRAGE在TE13与TE13R120细胞内的表达部位。结果:1 MTT结果显示细胞在接受X线照射后,随着照射剂量的增加细胞增长速度随之下降,但TE13R120细胞存活数量明显高于TE13,说明TE13R120细胞较TE13对射线抗拒。2 Western Blot及Realtime PCR结果显示NRAGE在TE13R120细胞中的表达量明显高于TE13,且si-NRG-TE13R120细胞中NRAGE表达量明显低于NC。3平板克隆形成实验证明NRAGE敲低后TE13R120细胞的克隆形成能力低于NC。4流式细胞术发现与TE13细胞相比,TE13R120细胞中对射线抵抗性最强的S期细胞比例增加,而G2/M期减少。而si-NRG-TE13R120细胞中S期细胞比例下降,G2/M期升高。5免疫荧光发现,NRAGE在TE13中主要在细胞质表达,而在TE13R120中主要集中于细胞核中。结论:1 NRAGE参与了TE13R120放射抗性的形成。2 NRAGE通过影响细胞周期分布,改变了食管癌细胞放射敏感性。3 NRAGE亚细胞定位变化可能参与了食管癌细胞放射抗性的形成。