苦参碱对人肺腺癌A549细胞的促凋亡作用及对Let-7a表达的影响

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目的:  观察苦参碱(matrine)对A549细胞增殖的影响并探讨苦参碱对A549细胞的Bcl-2、Bax凋亡蛋白表达的影响。探讨苦参碱对人肺腺癌A549细胞的Let-7a表达的影响。  方法:  1.采用细胞增殖毒性实验(MTT法)探讨0.25mg/ml、0.50mg/ml、1.00mg/ml、2.00mg/ml以及4.00mg/mg浓度的苦参碱对人肺癌细胞A549的体外增殖的影响。  2.Hoechst33342染色法观察以苦参碱浓度0.25mg/ml、0.50mg/ml以及1.00mg/ml干预72h后的A549细胞的形态学变化。  3.运用microRNA(miRNA)微阵列技术对以苦参碱浓度0.50mg/ml和1.00mg/ml干预72h后的A549细胞的miRNA的表达谱进行检测,对Let-7a的结果进行数据分析,并预测靶基因。  4.采用蛋白免疫印迹的方法检测以浓度0.25mg/ml、0.50mg/ml以及1.00mg/ml苦参碱对A549细胞Bcl-2、Bax凋亡蛋白表达水平的影响。  结果:  1.0.25mg/ml、0.50mg/ml、1.00mg/ml、2.00mg/ml以及4.00mg/ml浓度苦参碱均对A549细胞株增殖有抑制作用,与对照组比较均有统计学差异(p<0.05),具有时间剂量依赖性。  2.经苦参碱处理后的A549细胞的体积明显缩小,出现凋亡小体。蛋白免疫印迹的结果显示苦参碱可下调Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。经苦参碱干预后,Bcl-2/Bax比例下降,与对照组相比,苦参碱浓度为0.50mg/ml以及1.00mg/ml有统计学差异(p<0.05)  3.与对照组相比0.50mg/ml苦参碱浓度组上调A549细胞Let-7a的表达9.76倍;1.00mg/ml苦参碱浓度组上调A549细胞Let-7a的表达2.44倍。  结论:  1.苦参碱对人肺腺癌 A549细胞表现出较强的抗细胞增殖作用,其机制可能是苦参碱影响了A549细胞Bcl-2、Bax的表达的水平,从而导致细胞的凋亡。  2.苦参碱可以上调人肺腺癌A549细胞的Let-7a的表达并改变A549细胞的miRNA表达谱。
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