禾本科植物龙须草（Eulaliopsis binata）,是研究植物无融合生殖机理的宝贵材料,具有高度的无融合生殖程度和胚乳自主发生等特点。近年来随着研究的深入,一些与无融合生殖相关的基因相继被分离克隆,为了进一步研究这些基因的功能,迫切需要建立龙须草遗传转化体系。本实验以龙须草成熟种子为外植体,研究了影响成熟种子组织培养和植株再生的一些因素,建立了龙须草成熟种子再生体系。同时,以成熟种子诱导的胚性愈伤组织为转化受体,初步研究了影响根癌农杆菌介导的龙须草转化体系的主要因素,为后续建立稳定的遗传转化体系奠定一定基础。主要研究结果如下:1龙须草再生体系的建立（1）愈伤组织诱导:以龙须草4个居群的成熟种子为外植体,筛选龙须草愈伤组织诱导的适宜的2,4-D浓度和居群。结果表明:4个居群的愈伤组织诱导率没有明显差异,对不同浓度的2,4-D的响应情况一致,其中在添加7.0mg/L 2,4-D的MS培养基上,4个居群愈伤组织诱导率都达到较高值,平均诱导率为92.33%,且愈伤组织的生长状态最好。（2）愈伤组织继代和状态改良:通过逐渐降低继代培养基中生长素2,4-D的浓度和添加有机物质等措施,改良初代愈伤。结果表明:2,4-D的浓度由诱导时的7.0mg/L降至2.5mg/L,培养基中添加水解酪蛋白（CH）时,4个居群都能形成黄色或淡黄色,较干燥致密,表面光滑,颗粒明显的胚性愈伤。（3）愈伤组织的分化与植株再生:设计了两种细胞分裂素6-BA、KT和生长素NAA的组合来筛选适宜的愈伤组织分化培养基。结果表明:4个居群的愈伤组织均在添加6mg/L KT和0.2mg/L NAA的MS培养基上获得最高分化率,衡阳居群在4个居群中分化率最高,为42.84%,星子居群的再生率最高,为33.25%。2农杆菌介导的龙须草遗传转化体系的影响因素研究（1）潮霉素筛选浓度的确定:将龙须草胚性愈伤组织转到含有不同浓度潮霉素的继代培养基上观察愈伤组织的生长状况,以确定潮霉素的筛选浓度。结果表明:在本实验中,合适的潮霉素筛选浓度为50mg/L。（2）居群对转化效率的影响:以4个居群成熟种子的胚性愈伤组织为转化受体,比较转化后居群间报告基因（GFP）的瞬间表达率。结果显示:星子居群的GFP瞬间表达率最高,为30%,与其它3个居群的GFP瞬间表达率差异显著,表明星子居群可作为龙须草遗传转化的良好材料。（3）预培养时间对转化的影响:利用星子居群的愈伤组织为转化受体,筛选适宜的预培养时间。结果表明:预培养时间对愈伤转化的影响差异显著,经过3天预培养后,转化率最高为30.62%,是预培养的适宜时间。（4）农杆菌侵染浓度和时间对转化的影响:分别观察统计用不同浓度的农杆菌菌液感染胚性愈伤组织,比较GFP瞬间表达率。结果显示,龙须草转化所需农杆菌菌液的最佳浓度为OD₆₀₀值0.9。农杆菌的侵染时间低于30min时未见有GFP瞬间表达,适宜的感染时间为45min。（5）共培养时间对转化的影响:分别在共培养2d、3d、4d、5d、6d时检测愈GFP的瞬间表达情况,结果显示:共培养时间低于4天时,GFP的瞬间表达率逐渐上升,第4天时,表达率最高,达到30.49%,当共培养5天及以上时,GFP瞬间表达率降低,因此龙须草遗传转化的最佳共培养时间是4天。（6）转化细胞的筛选:将共培养后愈伤组织首先转移到抑菌培养基上一周,随后转入潮霉素梯度筛选培养基上,在第二次筛选培养基上继代2次后,长出抗性愈伤组织,未转化的细胞死亡。