猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)所致的一种高度接触性传染病,以母猪繁殖障碍以及各种年龄猪特别是仔猪呼吸道疾病为特征,给养猪业造成巨大的经济损失。临床上,PRRSV流行毒株日益多样化和复杂化,给PRRS的有效防控带来很大困难。建立快速、特异的鉴别检测方法,掌握当前广西PRRSV流行毒株的特点,探索有针对性的免疫防控措施,对有效防控PRRS具有重要意义。1.同时检测PRRSV美洲型经典株、变异株和TJM-F92疫苗株的多重RT-PCR方法的建立及应用为建立PRRSV的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV美洲型经典株、高致病性变异株以及TJM-F92疫苗株的Nsp2基因序列特点,设计2对特异性引物。经优化反应条件后,建立了能同时检测并区分PRRSV美洲型经典株、变异株及疫苗株的多重RT-PCR方法。该方法特异性强,与猪的其它病毒间不存在交叉反应;敏感性高,对重组质粒标准品的检出下限为1.13×103拷贝/μL。应用所建立的方法,对349份临床疑似病料进行检测,结果检出PRRSV阳性119份,其中美洲型经典株5份、变异株107份,TJM-F92疫苗株7份,并且有变异株和TJM-F92疫苗株混合阳性7份。表明,本研究成功建立了PRRSV美洲型经典株、变异株及TJM-F92疫苗株的多重RT-PCR鉴别检测方法,可用于PRRSV的临床检测及流行病学调查。2.广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2和ORF5基因的遗传多样性分析为了解广西地区PRRSV流行毒株的遗传进化情况,对2014-2016年间来自广西各地的部分PRRSV阳性病料进行Nsp2和ORF5基因的扩增和测序分析。结果,获得34个Nsp2基因序列和45个ORF5基因序列,均属于美洲型毒株。Nsp2基因间核苷酸序列的同源性为91.8%～100%,与 PRRSV 美洲型毒株 VR-2332、CH-1a、JXA1 及NADC30株核苷酸序列的同源性分别为81.3%～84.3%、88.9%～92.1%、94.3%～99.3%、73.5%～75.1%,而与PRRSV欧洲型毒株LV株核苷酸序列的同源性为51.5%～53.2%。ORF5基因间核苷酸序列的同源性为82.8%～100%,与 PRRSV 美洲型毒株 VR-2332、CH-1a、JXA1 及NADC30株核苷酸序列的同源性分别为83.7%～99.5%、85%～95%、83.8%～99.7%、83.2%～86.4%,而与PRRSV欧洲型毒株LV株核苷酸序列的同源性为62.4%～64.5%。基于Nsp2和ORF5基因推导的氨基酸序列绘制的遗传进化树中,广西地区的毒株主要分布在以JXA1为代表的IV亚群。表明,当前广西PRRSV流行毒株以JXA1株为代表的高致病性美洲型毒株为主,各毒株Nsp2和ORF5基因序列存在一定的差异,尚未发现欧洲型毒株和NADC30类美洲型毒株。3.PRRSV野毒感染猪群免疫接种弱毒活疫苗的效果分析为评估PRRS弱毒活疫苗的免疫效果,本研究在两个小型猪场各选取2窝仔猪,在免疫接种PRRSV弱毒活疫苗后不同时间采集血清,应用RT-PCR检测PRRSV核酸,应用N-ELISA和G-ELISA两种试剂盒检测PRRSV抗体。结果,免疫前Od可以从仔猪血清中检测到PRRSV野毒株核酸,直到免疫后30d;相对应的母猪在免疫前0 d可从血清检测到PRRSV野毒株核酸。试验仔猪在免疫前0 d未能检测到PRRSV抗体,但在免疫后30 d直到150 d试验结束均可检测到PRRSV抗体,其中N-ELISA试剂盒的阳性检出率在免疫后30、60 d高于G-ELISA试剂盒的阳性检出率,而在免疫后120、150 d则低于G-ELISA试剂盒的阳性检出率。使用两种ELISA试剂盒共同时检测216份血清样品,检测结果的符合率为95.83%;配对X2检验,P>0.05,两者差异不显著;kappa值为0.87,属于极强一致性;两者相关系数r为0.605,具有显著线性相关。表明,免疫接种弱毒活疫苗可以有效清除野毒感染猪群中的野毒株,N-ELISA和G-ELISA两种ELISA试剂盒均可用于评估弱毒活疫苗的免疫效果。4.高水平母源抗体仔猪免疫接种PRRSV弱毒活疫苗的效果分析本研究于大型规模养殖场进行两次试验,每次选取3窝仔猪,在免疫接种PRRSV弱毒活疫苗后不同时间采集血清,应用RT-PCR检测PRRSV核酸,应用N-ELISA和G-ELISA两种试剂盒检测PRRSV抗体。结果,在免疫接种后60 d内可在试验猪血清中检测到疫苗株核酸,而在整个试验期间始终未能检测到野毒株核酸。试验猪在免疫后Od具有较高的母源抗体,阳性率达到100%,此后逐渐下降,第28/60 d(第2次试验/第1次试验)达到低点后稳步提高,从第60/90d到150 d试验结束阳性率均为100%。应用两种ELISA试剂盒同时检测采集的329份血清样品,检测结果的符合率为96.96%;配对X2检验,P>0.05,两者差异不显著;kappa值为0.81,属于极强一致性;两者相关系数r为0.794,具有显著线性相关。表明,高水平母源抗体猪群接种弱毒活疫苗后取得良好的免疫效果,猪场可根据实际需要选用N-ELISA或G-ELISA试剂盒进行免疫效果评估。