【摘 要】
：
目的:通过基因编辑系统CRISPR/Cpf1稳定敲除肾癌769-P细胞中的长链非编码RNABC040587（LncRNABC040587）,并初步研究该LncRNA在酸性微环境下调控肾癌769-P细胞的功能和分子机制。方法:使用基因编辑技术CRISPR/Cpf1敲除肾癌769-P细胞中的LncRNA BC040587,得到769-PBC040587（-）细胞并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR
论文部分内容阅读
目的:通过基因编辑系统CRISPR/Cpf1稳定敲除肾癌769-P细胞中的长链非编码RNABC040587（LncRNABC040587）,并初步研究该LncRNA在酸性微环境下调控肾癌769-P细胞的功能和分子机制。方法:使用基因编辑技术CRISPR/Cpf1敲除肾癌769-P细胞中的LncRNA BC040587,得到769-PBC040587（-）细胞并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）来检测敲除效率。通过肿瘤细胞体外侵袭实验（Transwell实验）检测酸性微环境下769-PBC040587（-）细胞侵袭能力的变化;通过蛋白质印迹法（Western blot实验）观察酸性微环境下769-PBC040587（-）细胞中Snail和pAKT蛋白的表达变化情况。此外,还通过USUC数据库找寻LncRNABC040587上下游1M以内的邻近基因,并通过使用qRT-PCR检测其在对照组769-PVector细胞和实验组769-PBC040587（-）细胞中的表达有无差异,挑选可能与LncRNABC040587发挥生物学功能有关的基因。然后通过使用siRNA进一步降低769-PBC040587（-）细胞中相关基因的表达并通过Western blot实验观察相关信号通路有无改变。结果:qRT-PCR结果表明实验组细胞（肾癌769+PBC040587（-）细胞）中LncRNA BC040587的表达量显著低于对照组（肾癌769-PVector细胞）（P<0.05）。Transwell实验结果表明酸性微环境下肾癌769-PVector细胞侵袭能力增强,而肾癌769-PBC040587（-）细胞在酸性微环境下其侵袭能力无明显变化。Western blot实验结果表明,酸性微环境下肾癌769-PVector细胞中Snail和pAKT的表达水平上升（P<0.05）,而肾癌769-PBC040587（-）细胞在酸性微环境下Snail和pAKT表达水平变化无明显差异。qRT-PCR结果发现假基因RNU6-1200P和假基因RN7SL815P在769-PBC040587（-）细胞中稳定高表达（P<0.05）。使用siRNA将769-PBC040587（-）细胞中假基因RNU6-1200P和假基因RN7SL815P的表达下调。Western blot实验结果表明,实验组（769-PBC040587（-）细胞中假基因RNU6-1200P表达下降后,酸性微环境下作用1h组）与对照组（769-PBC040587（-）细胞酸性微环境下作用1h组）相比pAKT的表达增强（P<0.05）;另一实验组（769-PBC040587（-）细胞中假基因RN7SL815P表达下降后,酸性微环境下作用1h组）与对照组（769-PBC040587（-）细胞酸性微环境下作用1h组）相比pAKT的表达下降（P<0.05）。结论:LncRNABC040587是酸性微环境诱导肾癌769-P细胞侵袭能力增强的关键基因,该LncRNA通过调控Snail和pAKT发挥其生物学作用。假基因RNU6-1200P 是 LncRNABC040587 的下游调控位点并且在 LncRNABC040587调控pAKT中起到重要作用。肾癌769-P细胞中可能存在酸性微环境/LncRNA BC040587/假基因RNU6-1200P/pAKT途径调控细胞侵袭进程。
其他文献
目的研究中国江苏地区人群AP1S1基因的单核苷酸多态性与食管鳞癌的遗传易感性及食管鳞癌术后患者的生存期的关系。方法第一部分:本部分实验采用医院为基础的病例-对照（case-control study）研究,从1315例食管鳞癌患者和1043例对照受试者收集血液样本,使用LDR技术检测受试者AP1S1 rs4727480 G>A,rs4729666 C>T,rs35208462 C>T,rs6969
在现代汉语中,名量词无论是在人们的日常生活交际中,还是文本阅读中的使用都比较频繁,但汉语名量词自身所具有的独特性与其复杂性使得名量词成为对外汉语教学中的一大难点,尤其是对于母语为乌克兰语的学生来说,在学习汉语时,面对母语中所没有的“量”的概念常常会发生偏误,且在学习者的不同学习阶段均有所体现。因此,本文将对汉语中的名量词与乌克兰语中的表量形式进行对比,通过对比分析比较出汉语和乌克兰语表量特征的异同
身体活动可以促进身体健康和心理健康,还有益于提升社交,但当下我国的教育体制让学校建立和保持了以坐为主的学习氛围,而国内近二十年来城市化的高速发展使城市的密度不断增加,加剧了位于高密度中心城区的高密度学校环境对学生身体活动的限制,对形成健康的生活方式造成了负面的影响。社会生态学理论指出建成环境因素与其他因素一起,会对身体活动产生重要影响。根据环境行为学的理论,个体的决定基于该个体对环境的感知,并非基
互联网信息技术的不断发展促进着各行业领域的转化升级,教育领域由此应运而生的混合式在线教学日益受到广泛关注。尤其是在2020年全球性新冠肺炎疫情爆发以来,在“停课不停学”的总方针指引下,混合式在线教学作为替代传统课堂的最优选择被大规模推广,已逐步成为一种常态化的教学模式。在此背景下,对外汉语教学生态格局也发生了深刻转变,为不断适应时代发展的浪潮,无论是海外的孔子学院还是国内的对外汉语课堂,在线教学都
近年来,电商行业的崛起使得快递行业市场竞争日益激烈,每个快递公司都希望通过提升自身的配送能力和配送质量等方式来抢占更多的包裹配送市场,从而获取更多的利益,然而,包裹的“最后一公里”配送所存在的种种问题却制约着快递公司的发展。“最后一公里”物流配送是指将包裹从最后一个配送服务点配送到顾客手中的过程,也是整个包裹配送过程中成本最高、效率最低、环境污染严重和易瘫痪的环节,同时,由于其直接与顾客接触,也是
2020年是脱贫攻坚的关键之年、收官之年,在这百年未有之大变局下,靖宇县精准扶贫工作的不断推进为其社会经济工质量发展提供了有力支持,也是靖宇县精准扶贫工作进入新时代新阶段的有力保障,只有持续提升其扶贫质量,才能加快靖宇县实现真脱贫、真减贫,进一步提高靖宇县社会经济发展水平,加快乡村振兴步伐,促进农村充分发展,解决城乡不平衡不充分发展矛盾。本论文可以为解决2020年后靖宇县相对贫困问题提供依据,同时
本文利用Superchiral S-OX手性柱在高效液相色谱串联质谱仪（HPLC-MS/MS）上建立了柑橘中苯醚甲环唑四个对映体的残留分析方法。于2019年5?7月在贵州、广东和湖南进行了田间试验,考察了苯醚甲环唑对映异构体在柑橘上的残留行为,并对其在柑橘叶上的消解动态和柑橘果中的最终残留进行分析,通过残留量和对映体选择性比值探究苯醚甲环唑四个对映体在柑橘叶上的对映体选择性行为。本文考察了八种手性
设施农业,是在环境相对可控条件下,采用工程技术手段,进行动植物高效生产的一种现代农业生产方式,其发展历程表明,设施农业是典型的高投入、高产出、高效益产业,是化解资源约束、提升农业效益、促进农业可持续发展的最有效技术体系,具有露地农业所不具备的诸多优势,代表了现代农业发展的主流方向。吉林省地处中温带和寒温带,多年来积温不足的气候条件不仅限制了种植结构的多元化,还大大降低了土地产出效率和农业经营效益。
近年来,天然气以其干净、高效、方便储运等特点成为最主要的清洁能源之一,其市场需求不断扩大,为了满足恶劣环境下天然气管道运输的要求,高强度管线钢的发展应用日益受到重视。管线钢生产过程中,其轧后冷却的控制是决定管线钢最终组织形态的重要因素,因此轧后冷却的温度场以及组织演变的预测对于管线钢的组织性能控制具有重要的意义。本文以X120级管线钢为研究对象,建立了冷却过程中的温度场数理模型,采用有限元分析方法