趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在原发性干燥综合征患者外周血及其T淋巴细胞中的表达

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目的:原发性干燥综合征(primary Sjogren’s syndrome,pSS)是一种以侵犯唾液腺、泪腺等外分泌腺体,具有高度淋巴细胞灶性浸润为特征的弥漫性结缔组织疾病,国内发病率约为0.3%-0.7%,是一种严重危害人们身心健康的常见病和多发病。临床上主要表现为干燥性角、结膜炎,口腔干燥症,还可累及全身多个器官和系统如肺、肝、肾、胰腺及血液系统、神经系统等。目前干燥综合征发病机制仍不明确,对细胞因子在原发性干燥综合征发病中作用的研究是一热点问题,多集中在γ干扰素、IL-6、IL-17、TNF-α等领域,关于CXCL12/CXCR4在pSS发病中的作用研究少见报道。本研究旨在通过探讨CXCL12/CXCR4在原发性干燥综合征患者外周血及其淋巴细胞中的表达情况,分析其与自身抗体的表达、唇腺病理分级、疾病活动指数的相关性,初步了解CXCL12/CXCR4轴在原发性干燥综合征发生发展中的作用,为原发性干燥综合征的发病机制及临床诊疗研究提供新的思路。方法:1病例选择:收集河北省人民医院风湿免疫科2013年5月-2013年12月,30例原发性干燥综合征住院及门诊初诊病人,为试验组,均符合2002年修订的干燥综合征国际诊断(分类)标准,且除外肿瘤性疾病、其他自身免疫性等疾病,无特殊用药史(免疫抑制剂、糖皮质激素类药物等)。对照组25例,为年龄、性别与原发干燥综合征组匹配的健康志愿者。2实验方法:采用流式技术检测T淋巴细胞表面CXCR4的表达情况,RT-PCR检测外周血单个核细胞CXCR4mRNA的表达情况、采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA法)测定外周血CXCL12的含量。3分别使用免疫印迹法、散射比浊法、间接免疫荧光法检测患者血清中抗SSA抗体、抗SSB抗、RF以及ANA抗体。4pSS患者进行疾病活动指数评估:依照2009年欧洲风湿病联盟(EULAR)制定SS病情评估指数(ESSDAI),对pSS患者进行疾病活动度的评估。5唇腺病理分级:使用福尔马林液固定唇腺病理组织、石蜡包埋并进行切片、然后进行HE染色,唇腺活检病理分级按Chisholm标准分为Ⅰ~Ⅳ级。6统计分析:应用SPSS19.0统计软件进行统计分析,计量资料符合正态分布的结果以均数±标差(x s)表示,多组样本间均数比较采用Kruskal-Wallis H检验,非正态分布的资料采用中位数(四分位间距)[M(P25,P75)]表示,两组资料比较采用非参数Mann-Whitney U检验,两组间且符合正态分布者比较采用t检验。检验水准α=0.05。结果:1pSS患者外周血中CXCL12的表达水平:pSS患者组CXCL12的表达水平为411.0﹙337.2,481.5﹚pg/ml,与对照组72.0﹙63.5,94.0﹚pg/ml相比均明显增高,差异具有统计学意义,P<0.001。2pSS患者外周血T淋巴细胞表面CXCR4的表达:pSS患者组T淋巴细胞表面CXCR4表达阳性率为21.0(16.9,26.0)%显著高于健康对照组4.7(3.25,6.0)%,P<0.001。3pSS患者外周血单个核细胞CXCR4mRNA的表达:pSS患者组CXCR4mRNA的表达相对数为8.05(6.76,9.31),对照组为2.13(1.56,2.68),两组之间的差异有统计学意义,P<0.05。4pSS患者CXCL12/CXCR4的表达与自身抗体的相关性:30例pSS患者中,18例ANA阳性(60%),13例抗SSA抗体阳性(43%),15例抗SSB抗体阳性(50%),18例RF阳性(60%)。抗体阳性组定义为至少具有上述一项抗体阳性者;抗体阴性组定义为上述抗体均为阴性者,其中抗体阳性组18例,抗体阴性组12例。抗体阳性组外周血中CXCL12的表达水平为415.5(376.8,481.5) pg/ml,抗体阴性组为379.9(236.5,486.8)pg/ml,P>0.05,组间差别无统计学意义;抗体阳性组T淋巴细胞表面CXCR4表达阳性率为﹙23.0±5.1﹚%,抗体阴性组为﹙20.0±4.6﹚%,组间差别无统计学意义,P>0.05。5pSS患者CXCL12/CXCR4的表达与唇腺病理分级的相关性:30例pSS患者唇腺病理分级Ⅳ级有17例,Ⅲ级有13例。其外周血中的CXCL12的表达水平分别为(361.8±85.86)pg/ml和(374.0±33.08)pg/ml,两组之间比较无统计学意义(P>0.05)。其T淋巴细胞表面CXCR4表达阳性率分别为﹙21.41±4.97﹚%和﹙22.35±5.34﹚%,两组之间比,组间差别无统计学意义,P>0.05。6pSS患者CXCL12/CXCR4的表达与疾病活动指数的相关性:将pSS患者疾病活动指数由低到高分为4个等级,0-2分为Ⅰ级,3-5分为Ⅱ级,6-8分为Ⅲ级,9分以上为Ⅳ级,其患者病例数分别为12、7、6、5。其外周血中的CXCL12的表达水平分别为432.0(361.3,500.5)pg/ml、386.0(233.0,386.0)pg/ml、412.0(360.5,538.5)pg/ml、377.0(342.5,419.0)pg/ml;其T淋巴细胞表面CXCR4的表达分别为21.5(17.0,26.6)%、18.1(15.8,18.1)%、22.9(19.4,22.9)%、22.0(15.4,20.2)%。行统计学分析,发现CXCL12/CXCR4在不同疾病活动指数的pSS患者中的表达差异无统计学意义,P>0.05。结论:1pSS患者外周血中CXCL12、T淋巴细胞表面CXCR4以及外周单个核细胞CXCR4mRNA均呈现高表达,提示CXCL12/CXCR4在原发性干燥综合征的发生和发展中起着一定作用。2CXCL12/CXCR4在pSS患者抗体阳性组和抗体阴性组的表达水平没有差异,提示pSS患者CXCL12/CXCR4的表达与自身抗体的产生无关。3pSS患者CXCL12/CXCR4的表达与不同唇腺病理分级和不同疾病活动指数无相关性,未发现pSS患者CXCL12/CXCR4的表达与淋巴细胞在唇腺中的浸润及疾病活动度有相关性。
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