结扎血管及淋巴管对Walker-256细胞荷瘤淋巴结转移的影响

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目的:(1)从组织结构上描述近端Walker-256细胞荷瘤的腘窝淋巴结血管新生、淋巴管新生情况;(2)观察结扎血管及淋巴管对大鼠Walker-256细胞荷瘤腘窝淋巴结中血管/淋巴管新生的影响,探讨其在进展及转移中的可能作用;(3)进一步探讨淋巴结内癌细胞转移方式,恶性肿瘤淋巴结跳跃转移可能机制。方法:1.从南华大学实验动物部提取70只200g成年SD大鼠双侧足底注射Walker-256乳腺癌细胞建立移植瘤及荷瘤腘窝淋巴结转移模型,取6只制模成功大鼠进行淋巴结移植实验。剩余64只大鼠随机分成4组:结扎淋巴管组、结扎血管组、结扎淋巴管/血管组以及对照组。各组手术干预前测量各个腘窝淋巴结大小(统计分析有无统计学差异)。2.分别于术后的第3天、第7、第14天及21天检测:①观察大体观:淋巴结大小、体积变化;②病理HE观察结构改变情况,检测癌栓率;③选择各组干预后的转移淋巴结进行CD31与D2-40免疫组化染色,检测计数新生血管密度(MVD)及新生淋巴管密度(MLVD)改变情况。结果:(1)予以结扎干预后各时间点淋巴结体积大小较对照组缩小(P<0.05);各组间比较,全部结扎较单纯结扎淋巴管组或血管组缩小明显(P<0.05)。(2)大鼠Walker-256乳腺癌细胞腘窝淋巴结转移率为96.09%,证实制模成功率高。(3)HE染色:各组转移淋巴结结构破坏,移植淋巴结7天时萎缩明显,可见部分结果坏死;结扎干预组血管或淋巴管管内发现了癌栓,总癌栓率为24.22%(31/128),其中结扎血管组癌栓率为15.62%(5/24),结扎淋巴管组癌栓率为21.87%(7/24),全部结扎组癌栓率为6.26%(2/24),对照组癌栓率为53.13%(17/24)例,各组间比较有统计学差异(P<0.05)。(4)予以结扎干预后,3天、7天、14天、21天时间点的CD31及7天、14天、21天时间点的D2-40结果显示:结扎淋巴管组、结扎血管组以及全部结扎组的MVD值及MLVD值均低于对照组(P<0.05)。组内比较,各组MVD、MLVD随时间延长表达下降(P<0.05)。结扎血管组MVD较结扎淋巴管组下降明显(P<0.05),结扎淋巴管组MLVD较结扎血管组下降明显(P<0.05)。结论:(1)大鼠Walker-256细胞腘窝淋巴结转移模型为理想研究淋巴转移模型。(2)结扎血管及淋巴管可抑制大鼠Walker-256细胞荷瘤淋巴结血管/淋巴管新生。(3)结扎干预大鼠Walker-256细胞荷瘤淋巴结可减少淋巴结内癌栓率。
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