目的:研究亚甲蓝(methylene blue,MB)对由髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠发病的影响,观察小鼠脾组织中Th17、Treg细胞的比例变化,初步探讨MB对EAE小鼠的治疗作用以及可能免疫机制。方法:1将24只C57BL/6小鼠随机分为EAE组、MB组和control组,每组分别8只。以MOG35-55为抗原免疫,辅以百日咳毒素、完全弗氏佐剂及结核菌素,建立小鼠EAE模型,control组不免疫。免疫当天记为第0天,自免疫第1天开始给药,MB组小鼠给予MB 20mg/kg每日腹腔注射;control组及EAE组小鼠每日给予等体积生理盐水腹腔注射。观察小鼠的发病时间和每日神经功能评分。2将18只C57BL/6小鼠随机分为EAE组、MB组和control组,每组分别6只。以MOG35-55为抗原免疫,辅以百日咳毒素、完全弗氏佐剂及结核菌素,建立小鼠EAE模型,control组不免疫。免疫当天记为第0天,自免疫第1天开始给药,MB组小鼠给予MB 20mg/kg每日腹腔注射;control组及EAE组小鼠每日给予等体积生理盐水腹腔注射。免疫后25天(发病高峰期)将小鼠处死,无菌条件下取出小鼠的脾脏。流式细胞学方法测定小鼠脾组织细胞中Th17和Treg细胞的比例。结果:1各组小鼠发病情况:EAE组和MB组小鼠发病率均为100%,发病高峰期在免疫后25天左右。与EAE组相比,MB组发病高峰期的神经功能评分明显降低(P<0.01);MB组的发病时间较EAE组晚(P<0.05)。control组小鼠不发病;2各组小鼠脾组织中Treg细胞的比例变化:在发病高峰期,各组小鼠脾组织中Treg细胞比例均有明显差别。与control组相比,EAE组小鼠脾组织中Treg细胞比例明显降低(P<0.01);与EAE组和control组相比,MB组小鼠脾组织中Treg细胞比例明显升高(P<0.01);3各组小鼠脾组织中Th17细胞的比例变化:在发病高峰期,与control组相比,EAE小鼠脾组织中Th17细胞比例明显升高(P<0.05);与EAE组对比,MB组小鼠脾组织中Th17细胞比例明显降低(P<0.05);但MB组与control组相比,小鼠脾组织中Th17细胞比例无明显差异(P>0.05)。结论:1 MB干预可以降低EAE小鼠的神经功能缺损程度,使EAE小鼠的发病时间推迟。2 MB干预可能通过影响小鼠脾组织内Th17/Treg细胞比例从而使EAE小鼠神经缺损程度减轻,推迟发病时间,但其具体的机制仍待进一步研究。