系统性红斑狼疮是一种累及多器官、多系统的自身免疫性疾病，其患病率高达70-100/10万[1]。如果以全国16亿人口计算，我国的SLE患者已达112-160万之多，且多为年轻女性。其发病机制复杂，临床变化多端，诊治困难，死亡率高。 目前治疗SLE的方法很多，首选的治疗方法是糖皮质激素制剂。开始时剂量需较大，以期在1-2周内控制病情，必要时可应用皮质类固醇激素冲击疗法或加用免疫抑制剂治疗。但在皮质类固醇激素和免疫抑制剂治疗过程中，由于用药量大，时间长，容易出现副作用和并发症，如感染、诱发糖尿病、消化道溃疡、穿孔或消化道出血、骨折及骨缺血性坏死、精神异常等，很多患者最后死于激素的副作用和/或并发症，严重影响患者的生存期和生活质量。同时，由于上述药物的选择性不理想，部分患者经正规治疗仍不能有效控制病情。大剂量免疫球蛋白冲击疗法、血浆置换疗法以及周身淋巴结照射治疗等，由于未能针对病因治疗，且疗效短暂、费用较高，不能广泛应用。造血干细胞移植治疗虽有令人鼓舞的报告，然而技术条件要求高，价格也甚昂贵，很难普遍推广。因此，SLE的治疗仍是目前国内外公认的医学难题，尚无有效根治方法。1981年BEU-NUN[3]等人在研究由髓磷脂碱性蛋白主动免疫诱导的Lewis大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎时，第一次提出了T细胞疫苗的概念。目前国内外学者对一些与T细胞介导有关的自身免疫性疾病，器官、组织移植术后进行了T细胞疫苗治疗的实验研究，如类风湿性关节炎、自身免疫性甲状腺炎、免疫性心肌炎等，都取得令人鼓舞的结果。并且临床上将之应用于治疗RA，也取得了初步疗效。 SLE是以T和B淋巴细胞功能异常为特点的自身免疫性疾病，自身反应性T淋巴细胞的活化及由此介导的自身免疫反应是本病发生的中心环节[4]。早在上世纪90年代国外已有学者研究显示，抑制自身反应性T细胞的活性，可降低SLE病情的严重性及延长狼疮鼠的寿命[5]。因此清除自身反应性T细胞可能是SLE又一新的治疗途径。 识别自身抗原的自身反应性T细胞，是正常T细胞库的一部分，存在于外周循环中。独特型一抗独特型网络理论认为，在正常机体中，自身反应性T细胞受抗独特型的调节性T细胞的制约，处在数量较少和活性较低的状态，不引起AID，一旦这一免疫自稳状态被破坏，自身反应性T细胞便可活化、增殖并引起病理损害。针对这一理论，用灭活的自身反应性T细胞，诱导机体产生大量的调节性T细胞来抵抗自身反应性T细胞的致病作用，即为TCV的治疗原理，这项治疗措施是目前研究AID治疗的新方向。 CD4+CD25+T细胞是一种重要的调节性T细胞，最近越来越多的研究显示，CD4+CD25+T细胞数量及功能异常与许多AID有密切关系，免疫学上目前将CD4+CD25+T细胞视为调节性T细胞的代名词。CD4+CD25+调节性T细胞在SLE中的作用也是目前SLE发病机制的研究热点，多项研究发现，CD4+CD25+调节性T细胞在SLE患者中存在数量减少，或功能异常，与SLE患者病情密切相关。故本实验制备T细胞疫苗，免疫BXSB鼠后，检测CD4+CD25+T细胞，研究TCV对该细胞水平的影响，从而评价T细胞疫苗在SLE治疗上的应用前景。 另外，转录因子Foxp3与CD4+CD25+T细胞的关系也是近年研究的热点，国内外多项研究已经证实，Foxp3是CD4+CD25+调节性T细胞的功能相关基因，它作为CD4+CD25+调节性T细胞一个相对特异的标志，它的表达是该细胞发育及发挥功能的前提[9]。有学者研究显示，SLE患者外周血Foxp3的表达下降，同时其表达水平与CD4+CD25+调节性T细胞数量呈依赖关系。所以Foxp3基因的检测及相关分析，也是SLE治疗免疫学上的一个新指标，并有可能揭示TCV的治疗机制。 T细胞疫苗在系统性红斑狼疮中的实验研究国内做的不多，本文旨在结合上述SLE发病机制中免疫学方面新的进展，研究T细胞疫苗免疫BXSB鼠后，CD4+CD25+T细胞及相关基因Foxp3，和CD8+CD28+T细胞的变化，来探讨TCV治疗的可能机制和应用前景。 目的： 1.研究T细胞疫苗免疫对BXSB鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞、CD8+CD28+T细胞表达水平的影响，探讨T细胞疫苗治疗SLE的可能机制。 2.研究BXSB鼠经T细胞疫苗免疫后基因Foxp3表达的变化，及其与CD4+CD25+调节性T细胞的关系，从基因水平分析T细胞疫苗的可能机制。 材料与方法： 1实验动物 2.5月龄BXSB雄性小鼠12只，体重22-27g，北京大学医学院免疫系提供，饲养在南方医院SPF实验室。 2方法 (1)狼疮鼠T细胞的分离运用目前T细胞疫苗实验研究中常用的提取方法，即从BXSB鼠脾脏提取细胞。一切操作均严格遵守无菌操作及试剂说明书规则进行。 (2)T细胞疫苗的制备将提取的脾脏细胞悬液经伴刀豆球蛋白ConA有丝分裂、增殖，后用丝裂霉素C处理细胞，调整细胞浓度备用。 (3)T细胞疫苗皮下免疫取1×107细胞皮下免疫，并于首次免疫后第1，2周分别重复免疫。 (4)检测：于免疫前，首次免疫后1周、2周和4周分别从尾静脉取血lml，采用流式细胞术检测CD4+CD25+T细胞、CD8+CD28+T细胞的细胞比例及基因Foxp3表达比率。 (5)统计学处理组间CD4+CD25+T细胞、CD8+CD28+T细胞水平及Foxp3比率的比较应用SPSS11.5统计软件处理数据，进行重复测量数据的方差分析，结果中数据以“x±s”表示。CD4+CD25+T细胞与基因Foxp3表达水平进行双变量相关分析。 结果： 1.TCV对BXSB鼠外周血CD4+CD25+T细胞的影响 1.1TCV免疫BXSB鼠前后不同时间段内CD4+CD25+T细胞的表达Mauchly球形检验统计量W=0.429，P=0.261本研究显示，不拒绝球形假设，应用单变量检验方法时无需ε校正。TCV免疫前后不同时间段内CD4+CD25+T细胞表达水平差异有显著性意义。 1.2TCV免疫BXSB鼠后CD4+CD25+T细胞水平与免疫前比较CD4+CD25+T细胞在经TCV免疫后不同时间段均有不同程度的表达，且免疫后该细胞表达水平均值均高于免疫前。其中，免疫后1周与免疫前相比差异无统计学意义；免疫后2周、4周与免疫前相比差异有统计学意义。 1.3TCV免疫BXSB鼠后各时间段之间的CD4+CD25+T细胞水平的比较TCV免疫后2周、4周CD4+CD25+T细胞水平与免疫后1周相比差异均有统计学意义；免疫后4周与免疫后2周相比差异无统计学意义。 2.TCV对BXSB鼠基因Foxp3的影响 2.1TCV免疫BXSB鼠前后不同时间段内基因Foxp3的表达水平Mauchly球形检验统计量W=0.409，P=0.231本研究显示，不拒绝球形假设，应用单变量检验方法时无需ε校正。TCV免疫前后不同时间段内基因Foxp3的表达水平差异有显著性意义。 2.2TCV免疫BXSB鼠后Foxp3基因的表达水平与免疫前比较基因Foxp3在经TCV免疫后不同时间段的表达均值均高于免疫前。其中，免疫后1周和免疫前比较，二者无统计学意义；免疫后2周、4周与免疫前相比差异均有统计学意义。 2.3TCV免疫BXSB鼠后各时间段之间基因Foxp3表达水平的比较免疫后2周、4周基因Foxp3的表达水平与免疫后1周相比差异均有统计学意义；免疫后4周与免疫后2周相比差异无统计学意义。 3.基因Foxp3的表达与CD4+CD25+T细胞水平的相关分析 经相关分析，Spearmon相关系数rs=0.631，P=0.000(双侧)，即认为基因Foxp3的表达与CD4+CD25+T细胞的水平存在正相关关系。 4.TCV对BXSB鼠外周血CD8+CD28+T细胞的影响 4.1TCV免疫BXSB鼠前后不同时间段内CD8+CD28+T细胞表达Mauchlv球形检验统计量W=0.498，P=0.375本研究显示，不拒绝球形假设，应用单变量检验方法时无需ε(epsilon)校正。T细胞免疫前后不同时间段内CD8+CD28+T细胞表达水平差异有显著性意义(F=16.172，P=0.000)。 4.2TCV免疫BXSB鼠后CD8+CD28+T细胞水平与免疫前比较CD8+CD28+T细胞在T细胞疫苗免疫后不同时间段均有不同程度的表达，且免疫后该细胞表达水平均值均高于免疫前。且免疫后1周、2周及4周与免疫前相比差异均有统计学意义(P值分别为0.010，0.001，0.001)。 4.3TCV免疫BXSB鼠后各时间段之间的CD8+CD28+T细胞水平的比较免疫后2周、4周CD8+CD28+T细胞水平与免疫后1周相比差异均有统计学意义(P值分别为0.025，0.007)；免疫后4周与免疫后2周相比差异无统计学意义(P=0.074)。 结论： 1.BXSB鼠经T细胞免疫后，可促进CD4+CD25+T细胞、CD8+CD28+T细胞水平的升高，提示T细胞疫苗可影响BXSB鼠体内的免疫状态。这可能是T细胞疫苗发挥治疗作用的主要机制。 2.CD4+CD25+T细胞的水平与基因Foxp3的表达呈正相关，提示T细胞疫苗可能从基因水平发挥治疗作用。