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目的:研究前列腺癌患者组织中基因的甲基化水平、免疫细胞表面Tim-3表达水平与前列腺癌临床病理特征的关系,探讨甲基化和Tim-3在前列腺癌发生、侵袭和转移中的作用。方法:1)选取PITX2、WNT5a、SPARC、EPB41L3、TPM4等基因作为目的基因,然后通过甲基化特异性PCR方法分别检测35例良性前列腺增生组织中甲基化水平,接着再对157例临床DNA样本进行筛选,分析甲基化水平与前列腺癌临床病理特征的关系;2)利用流式细胞分析法检测35例良性前列腺增生症患者和157例前列腺癌患者血清中免疫细胞Tim-3表达水平,分析血清中Tim-3表达水平与前列腺癌临床病理特征的关系;采用免疫组织化学方法检测组织中Tim-3在35例良性前列腺增生症和157例前列腺癌标本中的表达水平,统计分析组织中Tim-3表达水平与前列腺癌临床病理特征的关系;3)采用western blot法检测转移潜能前列腺癌LNCa P细胞中Tim-3的表达水平,分析其表达水平与前列腺癌侵袭转移能力;采用Si RNA干扰前列腺癌LNCa P细胞中Tim-3的表达,MTT检测细胞增殖,Transwell小室实验检测前列腺癌LNCa P细胞侵袭能力变化。结果:1)前列腺癌患者组织中PITX2,WNT5a,SPARC,EPB41L3,和TPM4甲基化水平明显升高,提示这些基因甲基化水平与前列腺癌发生发展有一定的关系。根据不同PSA水平结果显示PSA<10ng/ml、10~20ng/ml、>20ng/ml组PITX2甲基化率分别为25.10%、28.64%及35.82%,不同PSA组中PITX2及WNT5a基因甲基化水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);Glenson评分≤7分组和≥8分组,PITX2基因甲基化率分别为26.31%、33.16%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05);根据不同TNM分期分组为≤T2期、Tx N1期及M1期组,PITX2基因甲基化率为23.13%、26.64%、38.37%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析发现PITX2甲基化水平与前列腺癌患者的关系最密切。2)前列腺癌患者外周血中CD4+T、CD8+T细胞表面Tim-3表达水平分别为(4.77±3.56)%,(5.90±4.91)%,良性前列腺增生的表达量为(0.96±0.54)%,(0.73±0.62)%,差异有统计学意义(P<0.05);前列腺增生和前列腺癌组中Tim-3免疫组化表达水平评分比较差异有统计学意义(P<0.05);前列腺癌免疫组化染色Tim-3表达水平据不同PSA水平结果显示,PSA<10ng/ml、10~20ng/ml、>20ng/ml组Tim-3免疫组化评分分别为3.92±0.75分、7.63±0.81分及10.37±0.35分,差异有统计学意义(P<0.05);根据不同Glenson评分,分为≤7分组和≥8分组,Tim-3免疫组化评分为11.02±0.96分,5.62±0.69分,差异有统计学意义(P<0.05);根据不同TNM分期分组为≤T2期、Tx N1期及M1期组,Tim-3免疫组化评分为4.27±0.38,7.34±0.71,10.31±0.82,差异有统计学意义(P<0.05)3)Tim-3对人前列腺癌细胞增殖、侵袭能力结果提示,对照组和过表达组和干扰组三组细胞:过表达组的Tim-3的表达水平显著高于对照组,而干扰组Tim-3表达显著低于对照组(P<0.05)。结论:1)前列腺癌患者组织PITX2基因甲基化水平高于良性前列腺增生;PITX2甲基化水平与PSA水平、Gleason评分及TNM分期有关,提示PITX2甲基化水平与前列腺癌的存在密切关系;2)前列腺癌患者血清及组织中Tim-3表达水平均高于良性前列腺增生;Tim-3表达水平与PSA水平、Gleason评分及TNM分期有关,提示Tim-3表达水平与前列腺癌存在密切的关系;3)Tim-3表达下调能抑制前列腺癌细胞的生长,Tim-3是前列腺癌的重要调节因子;Tim-3表达水平与前列腺癌侵袭、转移能力有关,可作为前列腺癌侵袭、转移的分子标记物;下调Tim-3能抑制前列腺癌细胞的体外侵袭和迁移能力。