纤维连接蛋白EDA、EDB片段在人体皮肤切创的表达及其重组蛋白的制备

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纤维连接蛋白在三个部位发生可变剪接,分别是EDA、EDB和ⅢCS(在大鼠称为EⅢA、EⅢB和V).大鼠损伤模型研究发现,EⅢA和EⅢBmRNA分别于伤后30分钟和伤后1小时显著增高,在伤后6小时内,EⅢA和EⅢBmRNA表达量均随时间延长而逐渐增大.为进一步明确人体皮肤切创纤维连接蛋白可变剪接片段EDA、EDB基因表达与损伤时间的关系,我们制备地高辛标记反意RNA探针,在人体切创皮肤标本组织上进行原位杂交,观察人体切创皮肤标本切创边缘细胞的FN-EDA、EDB mRNA表达情况与创伤时间的关系;在此基础上,我们构建融合了EDA、EDB基因片段的质粒,然后用原核细胞表达蛋白质,经过纯化、检测,获得重组融合EDA-EDB蛋白,为进一步制备抗体,通过免疫组化检测EDA及EDB蛋白质推测早期损伤时间打下基础.一、cFN可变剪接片段(EDA、EDB)在人体皮肤切创伤后不同时间的表达.二、重组纤维连接蛋白EDA-EDB融合蛋白的制备.
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