目的 为诱导受体对异种供体的免疫耐受，建立小→大鼠的稳定性低嵌合率的异种造血嵌合体诱导模型。并在嵌合率低于10％时，将嵌合体受体鼠的骨髓细胞反向移植给供体鼠，来研究造血嵌合体在克服移植物抗宿主病(GVHD)等方面的作用，并进一步观察反向移植后的新受体的生存期以及嵌合体的变化，初步探讨异种造血嵌合体的维持方法等。 方法 1、6～8周龄Wister和SD大鼠(清洁级)，60周龄SD大鼠(清洁级)，8～10周龄BALB/c小鼠(SPF级)，均为雄性、健康。分组进行骨髓移植。 2、第一步，SD大鼠经亚致死剂量全身照射后，由尾静脉输入Balb/c小鼠的骨髓细胞，2天后腹腔内注射环磷酰胺，诱导形成嵌合体大鼠，使其对Balb/c小鼠产生特异性免疫耐受。 3、第二步，当嵌合体大鼠的嵌合率低于10％时，BALB/c小鼠经致死剂量全身照射后随机分为三组，A组输入正常SD大鼠的骨髓细胞，B组输入正常SD大鼠的骨髓细胞和脾细胞，C组输入嵌合体SD大鼠的骨髓细胞和脾细胞。对嵌合体小鼠生理指标、嵌合率变化及GVHD发生情况等进行跟踪观察。 4、给予反向移植后的嵌合体BALB/c小鼠，尾静脉重复输注供者(正常SD大鼠)的单纯骨髓细胞，测定嵌合率情况。 结果 1、在BALB/c小鼠到SD大鼠的骨髓移植中，用TBI(5.0Gy)+腹腔注射CTX(100mg/Kg)，注射骨髓细胞量1.0×10~8，能够诱导出较低嵌合率的异种造血嵌合体。经染色体检测和单克隆抗体法证实异种骨髓移植成功。第30天嵌合率为9.4%~23.85%。第no天嵌合率下降为1 .06%~10.48% 2、当嵌合体SD大鼠的嵌合率低于10%时，其骨髓细胞经尾静脉输注给仅用致死剂量TBI的BALB/c小鼠，不再使用任何免疫抑制药物。FACS测定嵌合率，第30天为1 .17场0.2%之间，第1加天下降为0.88心.34%。 3、骨髓移植第45天，嵌合体BALB/c小鼠脾细胞对供者嵌合体SD大鼠及正常SD大鼠脾细胞产生了MLR明显下降，Sl值分别为1 .23士0.15，1.13士0.16:而对第三者Wister大鼠仍有强烈增殖反应，MLR一sI值为2.40士0.26。前两者间差异无显著性(P>0.05)，但都与后者有显著性差异(P<0.01)。只经TBI处理的BAL户以e小鼠对正常SD大鼠的MLR仍有强烈的增殖反应，sI值为2.16士0.12，与前两者差异有显著性(P<0.01)。 4、实验A组，未发生GVHD。实验B组，4只小鼠出现不同程度的体重下降、弓背体位、颤抖、体毛脏乱、腹泻等，肝脏、小肠切片均有明显的病理改变，主要表现为:肝实质内可见局灶性坏死，有灶性淋巴细胞及多形细胞浸润;肠粘膜结构破坏，部分脱落，有坏死灶和炎性细胞浸润。上述变化符合GVHD病理改变。实验C组，只有1只发生了轻度的GVHD，但小鼠外观表现不明显。B、C组都没有观察到慢性GVHD。 5、异种骨髓移植第2一3周，反向移植BALB/c小鼠外周血白细胞下降最明显，体重下降最低，死亡率最高。第巧天时，体重开始回升，但外周血白细胞总数继续下降。第60天，体重、外周血白细胞己与正常BALB/c小鼠无明显区别。但白细胞总数始终相对低于正常BALB/c小鼠同期正常值。第90天，小鼠体重增幅缓慢，外周血白细胞又有所下降，与第0天相比，差异有显著性(P<0.01);第150天，外周血白细胞再次回升，接近正常，与第0天相比，差异无显著性(P>0.01)。 6、以 150天为统计，实验A组13天内死亡5只，其余长期存活，没有发生GVHD现象。实验B组平均累积存活期为16天，95%可信区间 (13，19)，其中有4只小鼠因重度GvHD死亡。实验c组只有1只死于轻度GVHD。三组的生存期水平间的整体比较有统计学意义，差异有显著性(P<0.0006);而水平间的两两比较(Log~Rank)，c组与A、B组差异有显著性0值均小于0．05人A、B组之间差异无显著性o＝o．4538） 7、当嵌合率低于 5％时（第 120天），给嵌合 BALB／c小鼠经尾静脉注射正常 SD大鼠单纯骨髓细胞。第一次给予骨髓细胞 8 XIO’／只。一个月后（第150天）用单克隆抗体法上FACS测定，嵌合率为0．20～l．00％。重复上述操作，第二次输注单纯骨髓细胞为2X108。一个月后（第183天）嵌合率在0．36～1．19％。 结论 1、SD大鼠经亚致死剂量5刀Gy全身照射后，加单剂腹腔内注射环磷酸胺 100the，可以成功诱导形成小鼠一大鼠低嵌合率的异种造血嵌合体模型。SD大鼠对TBI不敏感，但对CTX十分敏感，而BALB儿小鼠则与之相反。 2、给供者输入受者的骨髓细胞，诱导形成对受者具有抗原特异性免疫耐受的嵌合体供者，再将含有嵌合体供者的骨髓反向移植给受者，可以有效克服异种骨髓移植间强烈的GVHD。异种骨髓移植GVHD的发生时间要比同种骨髓移植晚，且不易发生慢性GVHD。 3、嵌合体受者对供者有特异性耐受，但仍对第三者抗原保持强烈增殖反应。 4、将嵌合体供者的骨髓细胞反向移植给受者时，与以正常大鼠为供者的移植相比，更难于诱导形成嵌合体。 5、异种造血嵌合体可以长期存在，大于 120天。异种受者个体体重增长缓慢，外周血白细?