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抗冻蛋白(antifreeze proteins，AFPs)是一类能使生物体耐受低温的特殊蛋白质，首先在极区鱼类中发现，之后又从昆虫和植物等中被分离出来。它能阻止冰晶的生长，抑制体液结冰，从而起到抗寒防冻的作用。将AFPs基因转入一些鱼类和农作物，增强其抗寒能力，已有成功的先例。罗氏沼虾(giant freshwater prawn，Macrobrachium rosenbergii是一具高蛋白、低脂肪、在全球范围内都有养殖记录的重要水产品种，深受人们喜爱，但由于属热带、亚热带种类，对低温的适应能力较差，低于14℃就会死亡，最低要18℃才能生长，其不耐低温的特性大大增加了其养殖成本，严重阻碍了罗氏沼虾养殖业的发展。本研究的特色和创新之处在于，针对罗氏沼虾不耐低温，但体型相对较大，精荚明显的特点，首次将目前已知具有最强抗冻活性的云杉卷叶蛾(spruce budworm，Choristoneura fumiferana)抗冻蛋白(sbwAFP)基因(sbwAFP)，通过精子介导的转基因技术整合到罗氏沼虾的胚胎中，以期培育出耐低温的罗氏沼虾新品系。这不仅对罗氏沼虾的遗传育种工作是一个重大的突破，而且对带动和促进其它虾、蟹类等水生经济动物转基因育种工作的开展，改变我国目前的养殖结构，降低生产成本，促进现代养殖业的发展，提高经济效益，都具有重要的意义。 本研究采用重叠序列延伸法获得sbwAFP，经PCR扩增后，将其插入到质粒载体pCMV—EGFP—SV40UTR中，置于细胞肥大病毒启动子(CMVp)和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)cDNA(EGFP)之间，构建了表达载体pCMV—sbwAFP—SV40UTR。通过精荚微注射(spermatophore-microinjection，SMI)——一种精子介导的转基因技术导入罗氏沼虾，即将外源DNA直接注射入罗氏沼虾的精荚。其后的受精及卵的孵化均在正常条件下完成。以sbwAFP首尾两端的特异序列为引物，PCR分析SMI获得的虾胚胎的基因组DNA，有试样可得一308bp的扩增产物，与sbwAFP的大小相符，而仅注射PBS和未注射的阴性对照虾胚胎没有扩增条带，说明SMI获得的虾胚胎基因组馨糕嘿!S中确有sb蒯FP的整合。从250ng到1850ngpCMv一sbwAFP一Sv40UTR质粒DNA的注射剂蛋范围内，都可得到有整合的转基因胚胎。注射185Ong质粒DNA获得了至少16%的基因转移率。