【摘 要】
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目的研究miR-1293在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞株A549与顺铂耐药细胞株A549/DDP中的表达差异,及其在非小细胞肺癌顺铂耐药过程中的作用和分子机制。方法顺铂诱导建立肺癌耐药细胞株——A549/DDP细胞,MTT法检测细胞IC50,计算耐药指数。采用脂质体法将miR-1293抑制物（miR-1293 inhibitor）和阴性对照R
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目的研究miR-1293在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞株A549与顺铂耐药细胞株A549/DDP中的表达差异,及其在非小细胞肺癌顺铂耐药过程中的作用和分子机制。方法顺铂诱导建立肺癌耐药细胞株——A549/DDP细胞,MTT法检测细胞IC50,计算耐药指数。采用脂质体法将miR-1293抑制物（miR-1293 inhibitor）和阴性对照RNA（miR-NC）分别转染A549和A549/DDP。流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测miR-1293能否调控RUNX3;q PCR检测miR-1293和RUNX3的m RNA表达;蛋白免疫印迹检测MDR1/ABCB1、MRP1/ABCC1、Bcl-2、RUNX3、Akt1和p-Akt蛋白表达。结果A549/DDP细胞株建立,其对顺铂的耐药指数为7.23。miR-1293在耐药细胞株A549/DDP中的表达水平（3.89±0.08）显著高于其在A549（1.01±0.05）中的表达水平;RUNX3 m RNA和蛋白在耐药细胞株A549/DDP的表达与A549相比显著降低(tm RNA=7.74,P<0.05;t蛋白=20.04,P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-1293inhibitor组的IC50值显著降低（t=94.49,P<0.05）。miR-1293 inhibitor组MDR1/ABCB1、MRP1/ABCC1蛋白表达水平显著低于miR-NC组(tMDR1/ABCB1=10.61,P<0.05;tMRP1/ABCC1=39.57,P<0.05)。同时,miR-1293 inhibitor组细胞凋亡水平显著高于miR-NC组（t=7.15,P<0.05）。促凋亡蛋白Bax在miR-1293 inhibitor组表达升高（t=33.63,P<0.05）;凋亡抑制蛋白Bcl-2表达降低（t=11.62,P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示,野生型RUNX3 3’UTR+miR-1293组的荧光素酶活性显著低于其余各组,而突变型RUNX3 3’UTR+miR-1293组的荧光素酶活性与对照组无显著差异。蛋白免疫印结果显示miR-1293 inhibitor组RUNX3蛋白表达高于miR-NC组（t=17.75,P<0.05）;Akt和p-Akt表达水平显著低于miR-NC组(tAkt=67.55,P<0.05;tp-Akt=16.98,P<0.05)。结论miR-1293促进非小细胞肺癌顺铂耐药过程,其机制是:miR-1293靶向调控RUNX3,激活Akt信号通路,抑制A549细胞凋亡,从而促进A549/DDP细胞耐药性。
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