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第一部分TM4SF1蛋白在人上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义目的探讨TM4SF1蛋白在人卵巢组织及卵巢癌相应淋巴结转移灶中的表达及其与上皮性卵巢癌（EOC）临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测16例正常卵巢上皮组织、23例上皮性卵巢良性肿瘤组织、55例上皮性卵巢癌原发灶及30例配对淋巴结转移灶组织中TM4SF1蛋白的表达情况，分析其与上皮性卵巢癌临床病理因素及预后的关系。结果（1）TM4SF1蛋白在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率（90.90%）高于上皮性卵巢良性肿瘤组织（65.22%）及正常卵巢上皮组织（31.25%）、上皮性卵巢良性肿瘤组织中TM4SF1蛋白的阳性表达率高于正常卵巢上皮组织，差异均有统计学意义（P<0.05）；TM4SF1在配对淋巴结转移灶中全部呈现阳性表达（100%）。（2）TM4SF1蛋白在正常卵巢上皮细胞中的表达主要位于上皮细胞胞膜近基底膜处及细胞膜的其它部位和细胞质中，在卵巢良性肿瘤组织中的表达主要集中在肿瘤细胞胞膜近基底膜处及细胞膜其它部位，而在卵巢癌原发灶及淋巴结转移灶细胞中则主要分布于癌细胞胞质中。（3）Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌患者中TM4SF1蛋白的阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ期患者，中-低分化癌患者TM4SF1蛋白的阳性表达率高于高分化癌患者（P<0.05）。（4）TM4SF1蛋白阳性表达率与组织学类型、腹水量多少无明显相关（P>0.05）。（5）Cox模型多因素分析显示TM4SF1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达不是影响患者生存的独立预后因素。结论TM4SF1蛋白在上皮性卵巢癌原发灶及淋巴结转移灶肿瘤细胞中高表达，可能与卵巢癌的发生、发展及远处转移相关。第二部分RNA干扰TM4SF1基因对上皮性卵巢癌细胞系生物学功能影响的体外研究目的运用RNAi技术下调TM4SF1基因在上皮性卵巢癌细胞系HO8910PM的表达，研究干扰TM4SF1基因后对卵巢癌细胞生物学功能的影响。方法应用RT-PCR技术检测不同上皮性卵巢癌细胞系中TM4SF1基因的表达情况，筛选出高表达该基因的细胞系HO8910PM；针对TM4SF1mRNA序列设计3对siRNA片段，脂质体法转染TM4SF1高表达株HO8910PM，荧光定量PCR检测干扰效率，选出干扰效果最好的片段构建shRNA；脂质体法转染HO8910PM后用G418筛选稳定干扰株，荧光定量PCR及Western blot检测干扰效果，通过生长曲线及克隆形成实验、流式细胞仪检测细胞周期、Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的生长、增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果TM4SF1基因在SKOV3，HO8910尤其是HO8910PM细胞中高表达，在A2780细胞中不表达；荧光定量PCR显示，siRNA-TM4SF1-813片段沉默TM4SF1基因效果最好，抑制率约为61.5%；将构建好的pGPU6/GFP/Neo-TM4SF1-813转染HO8910PM细胞并筛选出稳定干扰细胞株后，荧光定量PCR检测TM4SF1沉默效率约为85%，Western-blot检测TM4SF1沉默效率为50%；细胞功能试验显示：干扰组即pGPU6/GFP/Neo-TM4SF1-813组细胞穿膜细胞数为37.67±3.79，较阴性对照组即pGPU6/GFP/Neo-control（107.31±5.13）明显下降（P<0.05）；干扰组细胞穿过Metrigel胶并透过膜的细胞数为（32.33±3.05），较阴性对照组（88.01±2.646）明显减少（P<0.05）；两组细胞生长、增殖、细胞周期进展差异均无统计学意义（P>0.05）。结论下调TM4SF1的表达能够抑制上皮性卵巢癌细胞HO8910PM的迁移和侵袭能力，对其生长、增殖无影响。第三部分上调TM4SF1基因对上皮性卵巢癌细胞系生物学功能影响的体外研究目的构建携带TM4SF1基因的重组慢病毒表达载体，研究上调TM4SF1基因后对上皮性卵巢癌细胞系生物学功能的影响。方法针对TM4FS1基因设计引物，扩增出TM4SF1基因全长；将TM4SF1基因及慢病毒表达载体pWPI连接构建重组慢病毒表达载体；pWPI、pCMV-dR8.74、pMD2.G共转染293T细胞进行慢病毒包装；病毒上清液感染宿主细胞A2780；流式细胞仪分选后扩大培养；荧光定量PCR及Western blot检测上调表达效果；通过生长曲线及克隆形成实验、流式细胞仪检测细胞周期、迁移和侵袭实验分别检测细胞的生长、增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果成功构建重组慢病毒表达质粒TM4SF1-pWPI；荧光定量PCR显示实验组TM4SF1-pWPI-A2780细胞TM4SF1mRNA表达量为242.200±9.385，明显高于阴性对照组（1.040±0.104）及空白对照组A2780细胞（1.794±0.147）（P<0.05）； Western-blot检测试验组可检测到TM4SF1蛋白表达，而阴性对照组及空白组均未显示TM4SF1蛋白条带；细胞功能实验显示：实验组细胞穿过Transwell小室底膜的数量为132.71±10.21，明显多于阴性对照组（69.67±9.05）及空白组（64.00±7.94）（P<0.05）；侵袭实验中，实验组穿过小室底膜的细胞数为100.01±11.14，较阴性对照组（47.33±7.51）和空白组（52.02±7.55）明显增多（P<0.05）；阴性对照组与空白组相比，细胞的侵袭和迁移能力均无差异（P>0.05），且三组细胞的生长和增殖能力相比差异无统计学意义（P>0.05）。结论过表达TM4SF1可以增强细胞的迁移和侵袭能力，但对细胞生长、增殖无影响。
