论文部分内容阅读
第一部分胃癌和胃正常粘膜组织2-DE图谱建立及差异表达蛋白质分析背景与目的胃癌是一种多因素相关的疾病,以往研究大多集中在单个或少数几个相关基因及其蛋白质产物上,难以反应胃癌DNA改变的全貌。近年来也采用一些新技术如比较基因组杂交、微陈列等从DNA或mRNA整体水平进行了研究,但由于DNA或mRNA的改变仍不能完全反映细胞内蛋白质的变化情况,并且蛋白质还存在翻译后修饰、转运定位、构象变化以及蛋白质与蛋白质或其他生物分子之间相互作用等一系列自身特有的问题。因此直接从蛋白质整体入手研究胃癌,并与胃癌中DNA或mRNA的改变情况相印证,将更全面真实地揭示胃癌的癌变过程和本质。本项目以胃低分化腺癌和胃正常粘膜组织为研究样本,建立两者的2-DE图谱,并应用质谱技术分析和鉴定出差异表达蛋白质,探讨差异蛋白质在临床诊断中的可能意义。方法以人胃低分化腺癌和胃正常粘膜组织为研究对象,应用双向凝胶电泳技术建立分辩率和重复性好的双向凝胶电泳图谱,并采用肽质量指纹和肽序列标签两种质谱技术对2-DE图谱中差异蛋白质斑点进行了蛋白质鉴定。结果成功地建立了分辩率高和重复性好的人胃癌和正常胃粘膜组织的2-DE图谱；应用质谱技术成功的鉴定到29个蛋白质斑点,其中上调表达蛋白质10个、下调表达蛋白质19个,在这些差异表达蛋白质中,有的差异表达蛋白质在其他肿瘤中得到证实；应用生物信息学方法并结合ExPASy和NCBI数据库中蛋白质有关信息,对所鉴定的蛋白质进行了亚细胞定位和功能分类的初步分析。结论应用2-DE／MS技术,鉴定了胃癌和正常胃粘膜组织之间差异表达蛋白质。差异表达蛋白质的发现对较全面了解胃癌发生发展可能有较重要理论意义和潜在的临床应用价值。第二部分胃癌和正常胃粘膜膜联蛋白A1和半乳糖凝集素-1表达水平及其临床病理意义研究背景本文第一部分应用2-DE方法建立了2-DE凝胶电泳图谱后分析了差异表达蛋白质,应用质谱技术成功地鉴定了29个蛋白质斑点,胃癌组织中10个蛋白质表达上调,19个蛋白质表达下调；为证实以上实验结果,本文选择上调蛋白(gal-1)和下调蛋白(ANXA1)各一个行胃癌和正常胃粘膜组织免疫组化研究。目的研究胃癌和正常胃粘膜组织ANXA1和gal-1表达水平并探讨其临床病理意义。方法选择45例胃癌及其相邻正常胃粘膜组织手术切除标本常规制作石蜡包埋切片。ANXA1和gal-1染色方法为EnVisionTM免疫组化法。结果胃癌组织ANXA1表达阳性率(62.2%)及其评分(2.7±1.1)明显低于正常胃粘膜阳性率(86.7%,x2=7.07,P<0.01)及其评分(4.5±0.8,t=9.01,P<0.01)；胃癌组织gal-1表达阳性率(66.7%)及其评分(3.4±1.0)明显高于正常胃粘膜阳性率(6.7%,x2=34.88,P<0.01)及其评分(0.3±0.9,t=15.50,P<0.01)。高分化腺癌、侵袭深度T1+T2及淋巴结无转移的胃癌病例ANXA1表达阳性率及其评分明显高于低分化腺癌、侵袭深度T3+T4及淋巴结转移病例(P<0.05或P<0.01)；高分化腺癌、侵袭深度T1+T2及淋巴结无转移病例gal-1表达阳性率及其评分明显低于低分化腺癌、侵袭深度T3+T4及淋巴结转移病例(P<0.05或P<0.01)。胃癌组织中ANXA1和gal-1表达评分之间呈密切负相关(γ=-0.36,P<0.01)。结论ANXA1和gal-1表达水平可能是反映胃癌发生、进展、临床生物学行为及预后的重要生物学标记物,ANXA1低表达和(或)gal-1高表达的胃癌可能预后不良。