盐霉素对肾上腺皮质癌SW13细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨

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目的:探讨盐霉素在体内外对肾上腺皮质癌SW13细胞的增殖、凋亡、周期、侵袭的影响及其作用机制。方法:以浓度为30、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0μmol/L的盐霉素处理SW13细胞,分别在24、48、72、96h时用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测其对增殖的影响并计算半抑制浓度(IC50)。流式细胞仪检测盐霉素处理后SW13细胞的周期及凋亡。通过AO-EB染色在荧光显微镜下观察盐霉素处理后SW13细胞的凋亡情况。划痕实验检测盐霉素对SW13细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验检测盐霉素对SW13细胞侵袭力的影响。蛋白免疫印记法检测β-链蛋白(β-catenin)与B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)的表达。体内实验观察盐霉素对裸鼠移植瘤生长的抑制情况。TUNNEL实验检测盐霉素在体内对SW13细胞凋亡的影响。免疫组化实验观察盐霉素在体内对SW13移植瘤PCNA、Bcl-2、β-catenin蛋白表达水平的影响。结果:CCK-8结果显示0~30μmol/L的盐霉素对SW13细胞的抑制呈明显的时间-计量依赖效应,24、48、72、96h对应的IC50依次为25.65、7.97、2.89、0.40μmol/L。流式检测结果显示,盐霉素处理SW13细胞后处于G1期的细胞百分比分别为(66.250±1.162)%、(71.693±0.849)%,与对照组(59.837±3.043)%相比差异具有统计学意义(P<0.05);凋亡率分别为9.9%、30.3%、3.4%,差异具有统计学意义(P<0.05)。AO-EB染色在荧光显微镜下观察盐霉素处理后SW13细胞的凋亡率较对照组明显升高。细胞划痕实验结果显示盐霉素SW13细胞的迁移能力下降。Transwell结果显示对照组与实验组细胞侵袭数分别为66.800±5.263、30.400±2.881、17.600±3.050,差异有统计学意义(P<0.05)。蛋白质免疫印迹结果显示Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin及抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调。体内实验结果表明盐霉素可抑制裸鼠移植瘤的生长。TUNNEL实验表明盐霉素在体内也可促进SW13细胞的凋亡。移植瘤免疫组化实验结果表明盐霉素在体内可降低SW13移植瘤PCNA、Bcl-2、β-catenin蛋白表达水平。结论:盐霉素在体内外可抑制肾上腺皮质癌SW13细胞的增殖,阻滞其周期,减弱侵袭力并诱导凋亡,其机制与干扰Wnt/β-catenin信号通路及下调PCNA及凋亡抑制蛋白Bcl-2有关。
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