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在烧伤患者中绿脓杆菌的检出率高居各种感染菌首位,绿脓杆菌所产生的致死性毒素绿脓杆菌外毒素A(PEA)是引起患者死亡的主要原因。现有的针对PEA的治疗方法主要分为主动免疫和被动免疫两种形式,但应用异源动物血清治疗,可能造成严重过敏反应,加之绿脓杆菌具有天然耐药性以及广谱抗生素的泛滥使用,使得多重耐药绿脓杆菌感染的情况日益严重。PEA毒素具有受体结合区、越膜区和毒性区,毒素由受体结合区与细胞表面广泛存在的受体结合,通过越膜区将毒性区转入细胞内发挥ADP核糖基化酶作用,使EF-2发生ADP核糖基化,失活EF-2,阻止细胞蛋白质合成,造成细胞死亡和组织、器官衰竭。所以抑制毒素与受体结合是保护细胞的重要环节。热休克蛋白(HSP)是一种高度保守且具有分子伴侣功能的应激性蛋白,同时具有增强免疫的生物学特性：通过模式识别受体激活效应细胞产生应答反应。因此本研究利用基因工程手段将PEA中序列高度保守、免疫原性突出的受体结合亚基与结核杆菌HSP65融合表达,经发酵罐高密度发酵并层析纯化获得融合蛋白HSP65-PEA,作为免疫原对实验动物进行免疫,经小鼠攻毒保护性实验,进行免疫效果评估。同时建立多克隆和单克隆ELISA抗体检测方法及鼠、兔抗体水平的ELISA检测方法。结果证明重组蛋白HSP65-PEA在大肠杆菌中获得高效表达,纯化获得纯度为95%以上的重组蛋白,用其免疫后小鼠能够产生足量滴度的保护性抗体,保护动物耐受PEA毒素攻击,在机体中可以产生对抗PEA毒素的能力,以5、10倍LD50致死剂量的天然精致PEA毒素攻击小鼠,同时ELISA检测抗体滴度,结果显示无佐剂组产生抗体滴度高于弗氏佐剂组和铝盐佐剂组,其攻毒保护率达到70-100%,证明该融合蛋白HSP65-PEA作为免疫原产生的抗体具备了保护PEA毒素攻击的能力,充分达到实验预期目的。综上所述,构建获得的高效融合表达蛋白HSP65-PEA具有很强的免疫原性,能够刺激机体产生高滴度的中和抗体,在体内中和感染的PEA毒素,防止毒素的侵袭和细胞毒性作用,同时证明结核杆菌HSP65可以作为自体佐剂,发挥抗原提呈和加强作用,抗体水平优于外来佐剂,避免了外来佐剂的不良反应,大大提高了蛋白的安全性。