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背景IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是最常见的原发性肾小球疾病之一,其病理机制复杂,是终末期肾病的主要病因。在我国,IgAN发病率约占原发性肾小球肾炎的45.3%,30-40%在10-25年内可进展为肾功能衰竭。目前研究认为,IgA分子的糖基化缺失、遗传因素及粘膜免疫等均参与了 IgAN的发病,但其确切发病机制仍未阐明。近年来,许多研究表明粘膜免疫尤其是参与粘膜免疫反应的重要抗体—分泌型IgA(secretory IgA,SIgA)在IgAN中发挥重要作用。我们的前期研究也证实IgAN患者肾小球系膜区沉积的SIgA具有致病性,可刺激人原代肾脏系膜细胞(Human Renal Mesangial Cells,HRMC)增殖、活化释放多种细胞因子,从而参与肾脏的损伤。因此,SIgA与IgAN发生发展密切相关。既往认为IgAN是肾小球系膜细胞增生性疾病,但研究发现与肾小球损伤相比,肾小管间质损伤与疾病进展关系更为密切,具有严重肾小管间质损害的IgAN患者通常较快进展至终末期肾衰竭,小管间质损伤程度与包括IgAN在内的肾小球疾病的肾功能下降及长期预后有关,且肾小管萎缩/间质纤维化是IgAN患者疾病进展的独立危险因素。既往研究表明,IgA沉积于系膜区后刺激系膜细胞分泌TNF-α,进一步通过球-管对话活化小管上皮细胞致其损伤;IgA刺激系膜细胞分泌的醛固酮和血管紧张素Ⅱ通过球-管沟通调控氧化损伤介导小管上皮细胞凋亡。我们的前期研究发现约1/3的IgAN患者肾组织系膜区有SIgA的沉积,2/3为IgA沉积,且部分SIgA沉积患者也伴有肾小管间质损伤。由此我们假设SIgA是否也通过系膜-小管对话介导IgAN小管间质损伤。本研究拟从系膜-小管对话这个新角度探讨SIgA在IgAN肾损伤中的作用机制。目的通过体内实验与体外共培养HRMC和人近端肾小管上皮细胞(human proximal tubule epithelial cells,HK-2)实验相结合,探讨SIgA是否能通过系膜-小管对话介导IgAN小管间质损伤,为IgAN治疗提供一种新思路。方法选取2017年9月至2018年9月,在本院住院,初治经肾活检确诊为原发性IgAN的患者96例,所有病例均除外过敏性紫癜、系统性红斑狼疮和糖尿病、活动性肝炎、肝硬化、严重代谢综合征等可能引起继发性IgAN的疾病。10例癌旁正常肾组织作为对照。(1)免疫荧光检测IgAN患者肾组织冰冻切片中SIgA的沉积;(2)收集肾组织SIgA沉积阳性的IgAN患者以及年龄和性别相匹配的健康志愿者的唾液,亲和层析法分离和纯化唾液中的SIgA,分别表示为P-SIgA(IgAN患者SIgA)和N-SIgA(正常人SIgA);(3)体外培养HRMC和HK-2,流式细胞术分别检测SIgA与HRMC及HK-2的结合率;(4)细胞刺激及共培养实验:SIgA(400μg/ml)分别单独刺激HRMC、HK-2及SIgA刺激的HRMC与HK-2共培养24小时,收集SIgA-HRMC组、SIgA-HK-2组及共培养组细胞上清,并提取各组细胞总RNA,ELISA和PCR分别检测以上三组上清及细胞中炎症因子TNF-α、TGF-β1及MCP-1的蛋白合成及mRNA表达。(5)组织验证:免疫组化法分别检测以上炎症因子在SIgA沉积阳性的IgAN患者肾组织中的表达,并与IgAN患者肾小管间质损伤进行相关性分析。结果1.IgAN患者肾组织中SIgA的沉积主要位于肾小球系膜区,且SIgA沉积阳性的患者约占1/3,而在小管间质区未见SIgA的表达。2.流式细胞术结果显示,SIgA与HRMC的结合率高达81.6%,而与HK-2的结合率不足3%。3.SIgA刺激HRMC后TNF-α、TGF-β1及MCP-1的蛋白合成及mRNA表达上调,而SIgA刺激HK-2组以上炎症因子的蛋白及mRNA表达无明显增加,共培养后TNF-α、TGF-β1及MCP-1的蛋白和mRNA表达水平明显高于SIgA-HRMC 组和 SIgA-HK-2 组。4.免疫组化结果表明,SIgA沉积阳性IgAN患者肾小球及小管间质区均有TNF-α、TGF-β1及MCP-1的表达,主要以小管间质区为主,且以上炎症因子的表达与IgAN小管间质损伤呈正相关。结论SIgA沉积于肾小球系膜区后刺激系膜细胞分泌炎症介质,可能进一步通过系膜-小管对话诱导小管上皮细胞释放炎症因子,从而介导IgAN小管间质损伤。