烯唑醇免疫亲和色谱柱的制备与应用

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烯唑醇(diniconazole)是一种兼具保护性、治疗性的广谱三唑类杀菌剂,对谷物、水果、蔬菜和其他粮食作物上的真菌病害具有很好的防效。与传统的样品前处理技术相比,免疫亲和色谱(IAC)技术具有操作简单、选择性强、净化和富集效果好等优点,是一种具有良好应用前景的样品前处理技术。本文首次采用溶胶-凝胶法制备了烯唑醇免疫亲和色谱柱,并对该免疫亲和色谱柱的应用特性进行了系统的评价。主要研究结果如下:1.将水解后的四甲氧基硅烷(TMOS)与烯唑醇多克隆抗体聚合,采用溶胶.凝胶法合成了免疫亲和色谱(IAC)柱固定相,并用其制备了对烯唑醇具有特异性亲和力的IAC柱。对IAC柱条件进行了优化,选择超纯水作为吸附与平衡介质,30%和50%(体积分数)甲醇水溶液作为洗脱剂。结果表明:在优化条件下,IAC柱对烯唑醇的动态柱容量达125.4μg/g。在河水、土壤、大米、面粉、水果中添加烯唑醇,经IAC柱净化、富集,洗脱液采用高效液相色谱(HPLC)检测,河水中烯唑醇平均回收率为90.36%-100.14%,相对标准偏差(RSD)为2.03%-6.08%;土壤中烯唑醇平均回收率为89.85%-97%,相对标准偏差(RSD)为2.06%-4.29%;大米中烯唑醇平均回收率为89.57%-93.95%,相对标准偏差(RSD)为4.61%-7.35%;面粉中烯唑醇平均回收率为89.64%-92.07%,相对标准偏差(RSD)为1.90%-7.32%;水果中的平均回收率为85.55%-94.02%,相对标准偏差(RSD)为3.38%-6.78%。本文建立的IAC柱技术为烯唑醇在河水、水果等样品中的的残留分析提供了一种新型、高效的前处理手段。2.本文在已获得烯唑醇单克隆抗体的基础上,制备了高柱容量的烯唑醇单克隆抗体免疫亲和色谱(IAC)柱,并对IAC柱条件进行了优化,选择超纯水作为吸附与平衡介质,30%和50%(体积分数)甲醇水溶液作为洗脱剂。结果表明:在优化条件下,MC柱对烯唑醇的动态柱容量达179.89μg/g。在河水、土壤、大米、面粉、水果中添加烯唑醇,经IAC柱净化、富集,洗脱液采用HPLC检测。烯唑醇标样添加浓度在0.01-5.0mg/kg之间时,平均回收率为80.15%-98.42%,相对标准偏差(RSD)为0.36%-5.92%。建立的方法符合农药残留分析的要求。本文建立的方法为开发商品化烯唑醇IAC柱奠定了理论基础。
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