【摘 要】
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目的 PAK1(P21-activated kinase1)是一保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,为Rho家族小鸟苷三磷酸酶(Rho-GTPase)Cdc42和Rac下游重要的靶蛋白,参与许多重要的细胞活动。PAK1主
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目的 PAK1(P21-activated kinase1)是一保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,为Rho家族小鸟苷三磷酸酶(Rho-GTPase)Cdc42和Rac下游重要的靶蛋白,参与许多重要的细胞活动。PAK1主要分布在脑、肌肉、脾中。PAK1包含N-端调节区和C-末端激酶区,它的N-末端调节区含GTP酶结合域(GTPase binding domain,GBD),它可介导PAK1与Rac和Cdc42的结合。研究表明,PAK1具有广泛的生物学功能,包括细胞骨架的动力学调节,细胞移动,生存和凋亡,细胞周期,基因转录调节,细胞生长信号转导和转化等,而这些功能的完成是由于PAK1磷酸化其下游靶蛋白引起的。到目前为止,已经发现了多种PAK1的底物及其相互作用蛋白。并且许多证据足以表明在肿瘤发生发展过程中存在PAK1信号转导途径。本研究通过观察PAK1重组蛋白在原核细胞中的表达情况及PAK1在真核细胞中的定位,为进一步研究PAK1的生物学性能提供理论和实验基础。 方法 1.总RNA提取及cDNA合成: 总RNA提取按照RNA提取protocol操作完成;在M-MuLV Reverse Transcriptase作用下逆转录为cDNA。 2.以cDNA为模板扩增PAK1 依据PAK1序列,设计2对引物,建立PCR反应体系,进行PCR循环设计,扩增PAK1。 3.重组质粒的构建 将PAK1基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体pGEX-5X-1中,构建重组质粒pGEX-5X-1/PAK1;同时,利用基因重组技术将PAK1基因
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