栀子煤污病病原菌鉴定及防治效果研究

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栀子是茜草科(Ruacbieae)药用植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实,别名木丹、黄栀子、山栀子等,在我国多地均有分布。栀子在历代本草和药典记载中均有记载,使用历史悠久。栀子具有清热、消炎、抗氧化、抗肿瘤、降血脂、增强免疫力等功效,在临床上常用于清心除烦、利尿通淋、抗炎消肿、清热利胆及外治扭挫伤痛。由于其丰富的药理活性和有效的应用价值,目前在市场中广受欢迎,成为研究的热点。随着市场、临床及科研人员对栀子需求的不断增加,野生栀子果实资源已严重匮乏。我国已在多个省市建立了大面积的中药材栀子种植基地,而大规模的栀子人工集中种植却加重了病虫害的发生。煤污病作为栀子的主要真菌病害之一,易在叶片和嫩枝上产生病斑,起因不明,发病范围广,降雨高温会加重病情,使造成巨大的经济损失。本研究通过形态学观察、显微鉴定,采用常规组织分离法经致病性测定和柯赫氏验证,运用现代分子生物学技术分析,对栀子煤污病病原菌进行系统的症状与病原菌鉴定,了解病菌的生物学特性,以及抑菌药剂的室内筛选,为栀子煤污病病害的防治提供科学的理论依据和有效的方法。结果如下:菌株在PDA培养基上24-36 h后开始长出稀疏的白色菌丝,菌落呈现近圆形或椭圆形,3 d后由中央开始向四周逐步转化为墨绿色。培养21 d左右时菌落边缘生出气生菌丝,菌落中央开始产生油状半透明液体,并在菌落表面产生12个不规则的界限明显的环痕。显微鉴别下菌丝壁薄透明、弯曲度小、分支少、细长丛生,有明显分隔;分生孢子长圆形,少数葫芦形,较透明,子囊长形,少数披针形,略弯,内含数个孢子。以供试菌株DNA为模板,菌株扩增得到539 bp的特异性片断,与NCBI上已知的基因序列进行相似性比对,结果表明,同源性最高的菌株是Glomerella septospora(隔孢丛壳菌),相似性为99%,最终确定该病原菌为子囊菌门小丛壳科小丛壳属隔孢丛壳菌(Glomerella septospora)。寄主范围实验结果表明,接种3 d后,仅有少部分植物出现了感染情况,分别是紫花含笑、杜茎山、桔梗、白薇。其中发病最严重的杜茎山,发病率高达80%,后依次是紫花含笑、桔梗、白薇,发病率分别为70%,60%,60%。其余植物均无发病情况,考虑煤污病可能具有一定的专属性。生物学特性实验研究表明栀子煤污病病原菌菌丝生长最适条件为25℃,pH为7,最佳的碳、氮源分别为蔗糖和硝酸钾,光照对菌丝生长无明显影响;子实体萌发最适条件为30℃,pH为7,最佳碳、氮源分别为蔗糖和酵母膏,光照对子实体萌发无影响;子实体和菌丝的致死温度均为65℃。子实体萌发情况与pH的关系基本与菌丝生长情况相似。抑菌药剂的室内毒力测定结果表明,对栀子煤污病的杀菌效果最好的是戊唑醇,线性回归方程为Y=0.4953X+6.1091(r=0.991,EC50=0.11)。其次为甲基硫菌灵、代森锰锌、百菌清,回归方程分别为Y=0.3336X+4.9171(r=0.991,EC50=1.28)、Y=0.3827X+4.2926(r=0.970,EC50=6.63)、和Y=0.5762X+3.6644(r=0.827,EC50=10.16)混合药剂效果测定实验表明,70%甲基硫菌灵-43%戊唑醇、70%甲基硫菌灵-80%代森锰锌、80%代森锰锌-43%戊唑醇、80%代森锰锌-60%苯醚甲环唑、43%戊唑醇-60%苯醚甲环唑混合药剂以不同的体积混合均能呈现较好的增效作用。其中70%甲基硫菌灵-43%戊唑醇、43%戊唑醇-60%苯醚甲环唑混合药剂抑菌效果显著,各组毒性比率均大于1.1。中药抑菌实验结果显示,大多数供试中药对栀子煤污病有一定抑制作用。其中黄柏、威灵仙、黄连、苍术、苦参、知母、蒲公英醇提液对隔孢丛壳菌有较好的抑菌效果,且抑菌率均超过了阳性对照组的化学药剂百菌清。其中40 mg/ml的中药黄柏提取液抑制菌丝生长效果最好,7 d后的隔孢丛壳菌菌落直径仅有16.45±5.59 mm,抑菌率高达83.47%,比阳性对照组使用的化学药剂百菌清还高30.84%。土茯苓、车前子对菌丝的生长反而起到了促进作用,抑制率为负值,不建议作为生物防治的开发。
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