肌肉生长抑制素（Myostatin,MSTN）是骨骼肌生长的负调控因子,研究表明MSTN基因自然突变会造成鼠、牛、猪和羊的双肌臀性状,提高了动物饲料转化效率和畜禽的产肉率。本论文应用CRISPR/Cas9系统开展兔MSTN基因编辑研究,以期获得MSTN基因编辑兔,提高兔生长速度,培育“双肌臀”兔新品系,论文获得如下研究结果:（1）兔MSTN g RNA设计与载体构建:应用软件于兔MSTN外显子1和外显子3共设计8条g RNAs,酶切连接定向克隆构建了8个g RNAs表达载体。采用脂质体转染法处理293T细胞,应用流式细胞仪观测红色荧与绿色荧光比例确定CRISPR/Cas9系统所设计的8条g RNAs外源性的敲除效率,结果显示外显子3上所设计的4个g RNA敲除效率显著高于外显子1上的4条g RNA,排位前三的敲除效率分别达到90.7%,89.5%和77.7%（2）兔胎儿成纤维细胞的基因编辑检测:采用组织块贴壁法培养兔原代成纤维细胞,使用处于成长对数期的成纤维细胞采用电转法进行转染。外显子3上4条靶序列g5-g8编辑效率分别为25%,45%,30%和40%,测序结果显示编辑效率最高的g RNA为g6和g8。（3）兔MSTN敲除模型制备检测:收集受精雌兔受精卵,将体外转录的g6和g8与Cas9以1:5混合,显微注射外源RNA的方式注射入受精卵,胚胎移植受体雌兔共计30只,实验妊娠率33.33%（10/30）,仔兔存活率61.11%（23/36）,存活仔兔中阳性率21.74%（5/23）。经进一步基因测序检测显示F0代五只基因敲除兔均为嵌合子,其中三只MSTN^+/-雄兔具有正常繁殖能力,两只MSTN^-/-雌兔多次配种,一直无法妊娠。MSTN^+/-雄兔获得的F1子代兔检测出与F0代相同基因型。（4）兔MSTN敲除模型表型观测:部分早产的MSTN-KO兔胎儿呈现出“大舌头症”,出生的活仔兔中MSTN-KO兔亦有部分出现“大舌头症”而造成吸奶障碍,出生后2-3天死亡。180日龄时,MSTN-KO的F0兔表现出“双肌臀”现象,MSTN-KO兔3708±43.06g,WT兔3224±48.64g,差异极显著（P<0.001,N=5）,与WT兔相比,MSTN-KO兔平均增重484g,Western Blot结果显示MSTN-KO影响MSTN基因表达。组织切片分析结果显示MSTN-KO兔比正常对照组臀部肌肉纤维横截面积增大。结论:本实验应用CRISPR/Cas9技术通过基因编辑成功地获得了MSTN-KO兔,出生后死亡仔兔以及部分难产仔兔均出现“大舌症”,发育正常的MSTN-KO兔呈现出“双肌臀”特征。本研究为培育获得生长速度快、产肉率高的双肌臀兔新品系奠定了基础。