对大米中呕吐型蜡样芽孢杆菌的多位点序列分型和毒力评价研究

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蜡样芽孢杆菌是一种条件致病菌,广泛存在于环境和受污染的食品中,能引发呕吐型和腹泻型两种食物中毒。本试验选取35株呕吐型大米分离株,从呕吐型菌株对秀丽隐杆线虫的毒害作用、产生物膜能力、多位点序列分型等方面,对呕吐型大米分离株做了初步的毒力评价和分子分型研究。以秀丽隐杆线虫作为模式生物,采用培养基生测法对35株呕吐型菌株进行生物测定后,发现25株能明显抑制线虫的生长,剩下的10株对线虫的抑制作用并不明显;以随机挑选的122株腹泻型大米分离株做对比,结果发现122株只有12株对线虫发育有明显的抑制作用,其余110株抑制效果很差。这表明线虫对呕吐型菌株很敏感,而对腹泻型菌株敏感度很差。几乎所有的细菌都会形成生物膜,蜡样芽孢杆菌形成的生物膜对食品加工设备会造成严重污染,并且难以清洗。运用微量孔板法测定了35株呕吐菌株的产生物膜能力,同时以随机选取的35株腹泻型毒株做对比试验,得出了与线虫试验结果完全相反的结论,即腹泻型毒株的产膜能力要远远强于呕吐型毒株。本试验结合RAPD技术(随机扩增多态性DNA标记)和MLST技术(多位点序列分型),首先通过RAPD技术初步选出了与标准株不同的13株呕吐性B.cereus菌株,然后对这13株呕吐性B.cereus进行MLST分型后,结果显示ST26序列型所占比例最多,共11株,另外发现2个为新的序列型,分别为ST795和ST811,这与文献中报道的大部分呕吐性菌株序列型为ST26是一致的,说明呕吐型菌株在进化上总体趋向于保守,分化程度不高。
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